纳升液相色谱鄄高分辨串联质谱研究不同分离方法对唾液外泌体.pdf

第46卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第9期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2018年9月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 1408~1414 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.181261 纳升液相色谱鄄高分辨串联质谱研究 不同分离方法对唾液外泌体蛋白质组的影响 1 1 2 *2 曾琼兰摇 吴 利摇 李水明摇 王 勇 1(深圳大学生命科学学院,深圳市海洋生物资源与生态环境重点实验室,深圳518060) 2(深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室,深圳518060) 摘摇 要摇 外泌体是一系列胞外囊泡,是生物标志物的来源,但目前尚无灵敏高效的唾液外泌体蛋白质分离方 法。 本研究采用质谱方法比较唾液外泌体试剂盒(ExoQuick,EQ)方法和超高速离心(Ultracentrifugation,UC) 方法分离外泌体的效果以及尿素缓冲液、RIPA裂解液、SDS裂解液提取外泌体蛋白质的效果。 Brodford法和 BCA定量测定结果表明,EQ方法分离0.5 mL唾液外泌体得到的蛋白质含量高于UC方法分离2 mL 唾液所 得到的蛋白质。 进一步的质谱分析表明,前者鉴定到的蛋白质数目亦多于后者;试剂盒分离唾液外泌体与尿 素缓冲液提取外泌体蛋白质的方法联用效果最佳,鉴定到194种蛋白质。 本方法重现性好、样品用量少、检测 结果稳定,可为在唾液外泌体中筛选疾病的标志物提供方法学参考。 关键词摇 纳升液相色谱鄄高分辨串联质谱;唾液外泌体;外泌体试剂盒;超高速离心法 1摇 引言 [1] 外泌体是一种直径为30~100 nm 的脂质包裹体结构,在透射电子显微镜下呈现杯状 ,存在于血 [2] [3] 液、尿液和唾液等多种体液中 ,包含DNA 片段、蛋白质、mRNA 和microRNA等物质 。 越来越多的 证据表明,宿主细胞或肿瘤细胞分泌的外泌体参与了肿瘤发生、生长、侵袭和转移,可以作为生物指标进 [4~6] [7] 行研究 。 Rabinowits等 基于全基因组表达检测,提出外泌体miRNA可以作为肺癌的诊断标记之 一。 另外,有研究者认为外泌体功能包括细胞信号传导、移除不需要的蛋白质以及细胞间病原体的转 [8] 移,利用这一途径的一种病原体是朊病毒,它是一种传染性颗粒,负责传染性神经退行性疾病 。 Street [9] 等 在人脑脊液中鉴定到外泌体,并且认为其可能是一些脑神经失调疾病扩散发展的病因,例如阿尔 茨海默病(Alzheimer忆s disease,AD)。 [10] [11] [12,13] 唾液外泌体的分离方式包括超高速离心法 、密度梯度离心法 、凝胶过滤法 、免疫亲和捕