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漳州卫生职业学院 内容:实验四 离体蛙心灌流 基础医学部实验中心 主讲教师：林艺 目的和原理 实验对象 实验准备 实验器材和药品 实验步骤及观察项目 注意事项 思考与讨论 实验四、离体蛙心灌流 目的和原理 实验四、离体蛙心灌流 正常的蛙心能按静脉窦的节律性自动产生兴奋，如将离体的蛙心保存在适宜的环境中，在一定时间内仍能产生节律性兴奋和收缩活动。由于心脏的正常活动还有赖于内环境因素的相对稳定，改变灌流液的成分可引起心脏活动的改变。 本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法，并观察某些离子、递质和强心贰对心脏活动的影响。 实验器材和药品 【实验对象】 蛙或蟾蜍。 【实验器材和药品】 蛙类手术器械、玻璃蛙心插管、铁支架、蛙心夹、张力换能器、BL-420系统、任氏液、无钙任氏液、3%氯化钙溶液、0.1%氯化钙溶液1%氯化钾溶液、l:10000 去甲肾上腺素溶液、l:10000肾上腺素溶液、l:10000乙酰胆碱溶液、2.5%碳酸氢钠溶液、3%乳酸溶液、0.0125%毒毛花甙K。 实验步骤概要 2.4.1制作标本 ⑴破坏脑和脊髓 ⑵暴露心脏 ⑶观察心脏的解剖结构 ⑷心脏插管 2.4.2连接仪器与装置标本 2.4.3启动并进入BL-420 系统，进行软件操作 2.4.4观察项目 2.2.5结果处理 ⑴观察描记正常的蛙心搏动曲线 ⑵观察钙离子的作用 ⑶观察钾离子的作用 ⑷观察去甲肾上腺素的作用 ⑸观察肾上腺素的作用 ⑹观察乙酸胆碱的作用 ⑺观察[H+]的作用 ⑻观察强心药的作用 2.4.1制作标本 ⑴破坏脑和脊髓 同“实验一、蛙离体神经干生物信号与兴奋性检测”的标本制作⑴。 ⑵暴露心脏 同“实验三、期前收缩和代偿间歇”的标本制作⑵。 ⑶观察心脏的解剖结构 暴露心脏，用小镊子夹起心包膜，沿心轴剪开心包膜，仔细识别心房、心室、动脉圆锥、主动脉、静脉窦、前后腔静脉等解剖结构（图2-4-1 、2-4-2 ）。 ⑷心脏插管 在右主动脉下方穿一根线，用玻璃分针将心脏拨翻至背面，将前、后腔静脉一起结扎（注意勿扎住静脉窦），再将心脏复至原位，在左总动脉干下穿2 条线，一条在左总动脉上端结扎作插管时牵引用，另一条在动脉圆锥上方系一松结，用于结扎固定蛙心插管。用眼科剪在松结扎上方左总动脉根部剪一小斜口，将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入主动脉，至动脉圆锥略向后退，并转向心室的中央方向，在心室收缩期插入心室（如插管已插入心室，可见管内液面会随着心室的舒缩而上下波动），将预先准备好的松结扎紧并固定于插管侧面的小突起上以免插管滑出心室。轻轻提起插管，在结扎线远端分别剪断左主动脉、右主动脉、左右肺静脉和前后腔静脉，将心脏离体，用新鲜任氏液反复换洗蛙心插管内含血的任氏液，直至插管内无血液残留为止，保持液面1cm 。 2.4.2连接仪器与装置标本 用试管夹将蛙心插管固定在铁支架上，用蛙心夹在心脏舒张期夹住心尖组织约2mm，将其上的线头连至张力换能器（图2-4-3 ） ，调节连线之松紧，注意让线垂直。 图2-4-3 2.4.3启动并进入BL-420 系统，进行软件操作 ①在1 通道的输入接口上连接张力传感器。 ②开机进入BE-420 系统。 ③选择“输入信号”菜单中的“l 通道”菜单项，以弹出“l 通道”子菜单；在“1 通道”中选择“张力”信号。 ④使用鼠标单击工具条上的“开始”命令按钮。 注：上述步骤的③、④亦可由下面的步骤替代： 选择“实验项目”菜单中的“循环实验”菜单项，以弹出“循环实验”子菜单；在子菜单中选择“蛙心灌流”实验模块。 ⑤根据窗口中显示的心搏曲线，再适当调整实验参数以获得最佳的实验效果。 ⑥观察正常的心搏曲线之后，在每次更换药品之前，打开屏幕右下角的特殊实验标记编辑对话框，选择一个已经编辑好的特殊实验标记组或自己新建一个特殊实验标记组或添加一个新的实验标记，然后点击“OK ”即可完成实验标记。 2.4.4观察项目 ⑴观察描记正常的蛙心搏动曲线，注意观察心跳频率、强度及心室的收缩和舒张程度。 ⑵观察钙离子的作用 ①将插管内任氏液全部吸出，换入无钙溶液，观察心搏曲线，当心搏曲线开始出现变化时立即将无钙溶液吸出，用新鲜任氏液反复换洗，待曲线恢复正常时，再做下一项实验。 ②任氏液中加入3%氯化钙溶液1∽2滴，观察心搏曲线，同样，当心搏曲线开始出现变化时立即更换新鲜任氏液，待曲线恢复正常时，再作下一项实验（以下要求相同）。 ⑶观察钾离子的作用 任氏液中加入1%氯化钾溶液1∽2滴，观察心搏曲线的变化，待效应出现，即用任氏液换洗至心收缩曲线正常。 ⑷观察肾上腺素的作用 任氏液中加入1:10000肾上腺素溶液1∽2滴，观察心搏曲线的变化。 ⑸观察去甲肾上腺素的作用 任氏液中加入1:10000去甲