肉碱-食品与发酵工业.pdf

酶转化法制备工厂肉碱研究进展‘ 田金强02，王 强2 1(江南大学食品学院，江苏无锝，214036)2(中国农业科学院农产品加工研究所，北京，100094) 摘要对酶转化法制备L-肉碱的菌种选育、工艺优化、合成代谢途径及下游技术等方面的研究进展进行综 述，并由此提出，提高以巴豆甜菜碱为前体的酶转化法的转化率、获得L_内碱和未转化巴豆甜莱碱高教、经济的 分离技术、消减以r丁基甜菜碱为前体的培养基成本并缩短转化时间以及寻找廉价、与L．内碱物化性质差异较 大的前体物质以减少产品纯化费用是夸后酶转化法制备L-内碱研究中应重点解决的问题。 关键词 L-内碱，制备，酶转化法，研究进展 L_肉碱被广泛应用于药物、化妆品、功能食品、 肉碱酶转化法制备方法，早在1980年代，瑞士Lonza 食品及饲料添加剂““]。制备L一肉碱的方法有提取 公司(世界上最大、最早的肉碱生产厂家)即以介于农 法、化学合成法、酶法和微生物发酵法，酶法叉包括酶 转化法和酶拆分法2类。提取法是从肉或乳中提取 L-肉碱。酶转化法是利用纯化的酶或菌体细胞将L_为菌种，采用补料分批工艺进行L-肉碱的工业化生 肉碱代谢的前体物质(目前包括r丁基甜荣碱、巴豆 产。该菌株性能优异，采用细胞循环连续生产系统， L肉碱的产量高达60 g／(L·h)， 甜菜碱、D一肉碱或3一脱氢肉碱)转化为L．肉碱。酶 g／L，生产率5．4 拆分法是将DL一肉碱或其衍生物通过酶或菌体细胞 转化率95“以上，采用补料分批工艺可使r丁基甜 专一性水解其中的一种光学异构体，然后根据反应产 菜碱几乎完全转化为L．肉碱(转化率为99．5％)。 物与未反应底物性质的差别来进行分离。微生物发 但是HKl349的产酶培养基组成复杂，故原料成本 酵法是使用不含有L．肉碱代谢前体的传统培养基来 较高，且转化反应时间较长(70h以上)，因而人们试 使微生物代谢合成L一肉碱。 图选育出其他更优良的菌种。GsN 提取法和微生物发酵法，产量及生产效率低，体 用无色杆菌(m^romo蚰cfercyczDc如盯)转化62h， 系成分复杂因而分离纯化成本高，提取法的原料成本 L-肉碱产量达15g／L，转化率为45％H]，其生产性能 也很高。相比之下，酶法则具有产量及效率高、代谢 物单一因而分离纯化成本低等优点。就酶法而言，酶 转化法要优于酶拆分法，酶拆分法充其量50％的底 菜碱转化反应结束后，反应体系经过以下处理即可得 物转化为L-肉碱，较前者增加了原料成本和分离成 到L．肉碱产品：微滤和超滤分离菌体细胞及澄清转 本。因此，L-肉碱的制备方法，产业化价值高的是化 化液、电渗析或树脂除盐、反渗透浓缩、异丙醇脱水、 学合成法和酶转化法。这2种方法相比较，酶转化法 活性碳脱色及去除有机杂质、重结晶04]。 较化学合成法具有环境友好、成本低、产品安全性高 2从巴豆甜菜碱制备L．内碱 等特点，是较有吸引力的方法口]。目前，我国主要采 用化学合成法制备L-肉碱，酶转化法发展相对滞后， 利用肉碱脱水酶立体专一性水合巴豆甜菜碱可 为此，文中对酶转化法制备L-肉碱的技术发展现状 制备L_肉碱，变形杆菌(m￡。“J)和大肠杆菌 进行综述。以期为L肉碱的研究和开发提供指导。 (Bc^s—c^缸)是合成肉碱脱水酶的有效菌株口4]。 由巴豆甜菜碱合成L_肉碱为可逆反应，理论转化率 1 由r丁基甜菜碱制备L_肉碱 不超过50％，但是该方法有诸多优点：巴豆甜菜碱既 由r丁基甜菜碱制备L-肉碱起催化作用的酶是 容易以DL一肉碱或拆分废弃物D一肉碱为原料脱水 巴豆甜菜碱脱氢酶。该方法是最早实现工业化的L- 制备，也容易由环氧氯丙烷廉价合成，且产酶培养基