微生物实验考试复习题.docVIP

微生物实验考试复习题 1、使用油镜观察细菌染色标本时为何要加香柏油？ ①添加香柏油可增加亮度：空气的折射率为1.0，玻璃的折射率为1.5，香柏油的为1.52，玻璃和香柏油的折射率相差很小，当在高倍镜下观察时加香柏油有聚光作用，从而可增加视野亮度。 ②添加香柏油可增大数值孔径：数值孔径NA=nsin（α/2），香柏油的折射率大于空气，因此相比于不加香柏油时n值增大，从而数值孔径NA增大，便于观察到清晰的菌体结构。 2、简单染色法有什么用途？ 简单染色法是只使用一种染料使菌体一次性着色的方法，可用来观察细菌的形状、大小、细胞的排列状态。 3、在你所作的革兰氏染色制片中，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌各染成何色？它们是革兰氏阴性菌还是革兰氏阳性菌？绘出它们的形态图。（图见报告册P2） 大肠杆菌 染成红色 革兰氏阴性菌 枯草芽孢杆菌 染成紫色 革兰氏阳性菌 4、作为革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？其染色成败的关键是什么？ 不能过后的原因有两点： ①脱色时间很短，若图片很厚则脱色不充分。 ②过于浓厚不利于观察。 酒精脱色是染色成败的关键，若脱色过度，革兰氏阳性菌也可以被脱色而染成革兰氏阴性菌，若脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。 5、培养基的概念，培养基的类型，3种主要培养基的用途 培养基：培养基是用人工的方法将多种营养物质按微生物生长代谢的需要配制成的一种营养基质。 培养基的类型:按照配制培养的营养物质来源可将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。按培养基的物理状态可将培养基分为液体培养基、固体培养基和半固体培养基。按培养基的功能和用途可将培养基分为基础培养基、加富培养基、选择培养基和鉴别培养基。 3种主要培养基的用途： = 1 \* GB3 ①牛肉膏蛋白胨培养基：用于分离、培养细菌以及测定其数目 = 2 \* GB3 ②高十一号合成培养基：用于分离、培养放线菌 = 3 \* GB3 ③马丁—孟加拉红培养基：用于分离、培养真菌 6、培养基配制好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？ 培养基配置好后之所以要立即灭菌是因为其配制过程均没有在无菌条件下进行操作，因而培养基和盛放培养基的器皿（试管、三角瓶等）均有大量细菌。这些细菌在丰富的培养的营养条件下会大量繁殖，消耗掉培养基中的营养物质。若长时间不灭菌，培养基中的营养成分将在2h内消耗殆尽，后面即使将其灭菌也不能再用于培养微生物。 灭菌后的培养基可采用两种方法进行无菌操作：①在28℃恒温培养箱中培养48h；②在37℃恒温培养箱培养24h。培养后观察培养基表面是否有菌落形成，若无则无污染，若有则培养基已污染，不能用于培养微生物。 7、为什么高压蒸汽灭菌比干热灭菌所需的时间短，温度低？ ①高压蒸汽灭菌对细胞成分的破坏作用更强，水分子的存在有助于破坏维持蛋白质三维结构的氢键和其他相互作用弱键，更易使蛋白质变性。 ②高压蒸汽灭菌存在潜热，当气体转变成液体时可放出大量热量，故可迅速杀灭细菌。 ③高压蒸汽比热空气穿透力更强，更能有效杀灭微生物。 8、当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠。 将未知菌株培养12-16h，时间不能太长（太长易长芽孢） 选用大肠杆菌和枯草芽孢杆菌作对照染色 如果对照组中紫色和红色同时出现，说明染色技术操作正确 9、绘出你所观察到的霉菌、放线菌菌丝体和孢子形态图。 各形态图的比较，请参照报告册P4. 放线菌，油镜观察，放大倍数10×100， 霉菌，放大倍数10×40 10、将各种细菌对大分子物质的水解结果填入下表。 菌名 淀粉水解试验 明胶液化试验 枯草芽孢杆菌 阳性（无色） 阳性 大肠杆菌 阴性（蓝色） 阴性 普通变性杆菌 阴性（蓝色） 阳性 记录平板菌落计数结果，并分析土壤微生物分布状况（数量、颜色） 采用稀释平板计数法分离土壤中的微生物。 实验方法： 灭菌及实验准备 A、配置培养基：根据要实验预期要分离的微生物种类配置相应的培养基，如分离放线菌的高氏一号琼脂培养基、分离霉菌的马丁氏培养基等。 B、将配置好的培养基及实验所需的器材在高温高压下灭菌（100mL三角瓶、平皿、100mL无菌水、1mL吸管、试管数支、刮铲等） 样品稀释液的制备 准确称取待测样品5g，放入装有45mL无菌水并放有小玻璃珠的100mL三角瓶中，用手或摇床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置20~30s，即成10-1稀释液；再用1mL无菌吸管，吸取10-1稀释液1mL，已入装有9mL无菌水的试管中，吸吹3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；以此类推，连续