布病检验技术和研.pptxVIP

布病检验技术及研究;世卫组织建议的检测包括：;实验室检查方法;（三） 免疫学检查 平板凝集试验 虎红平板（RBPT）或平板凝集试验（PAT）结果为阳性，用于初筛。 试管凝集试验（SAT） 用于确诊。 补体结合试验（CFT） 滴度1：10 +及以上。 布鲁氏菌病抗-人免疫球蛋白试验（Coomb’s） 滴度1：400 +及以上。 ;一、虎红平板凝集试验（RBPT）;样品（标本）采集要求及采样量 用灭菌注射器无菌操作采取静脉血5ml置于无菌一次性采血管内(不加任何抗凝剂的空管采血3-5ml)，置斜面，分离血清。 所需试剂、仪器设备、试验环境条件 清洁脱脂玻片或凹形孔的玻片、1ml吸管或微量加样器、微型玻璃搅棒（可用牙签替代）、虎红平板凝集抗原、被检血清。 操作步骤 在玻片上加0.04ml被检血清，然后加入虎红平板抗原0.04ml，摇匀或用玻璃搅棒混匀，在5min内判定结果。 ;质量控制 所用器材洁净，试剂标准，并在有效期内使用，所加剂量必须准确。血清标本不得发生溶血 结果判定 在5min内出现可见的凝集现象为阳性反应无凝集现象出现为阴性。 工作时限要求 个案病例，送检材料2日内完成，大批量样本不得超过7日。如全血不能及时分离血清，可冷藏4°C保存，但保存期不得超过3日。血清可冷冻保存，保存期不得超过2月。 ;优点：简便、快速、易掌握，敏感性较好；可作为筛查试验；经济、方便。 注意事项： 1）观察结果在自然光状态下。 2）混合液体面积尽量大，使得抗原和 血清中抗体充分反应。 ;二、试管凝集试验（SAT）;样品（标本）采集要求及采样量 用灭菌注射器无菌操作抽取静脉血5ml、3000转/分离心15min分离血清备检。 试剂及器材 试管凝集抗原、被检血清、阳性血清、稀释液（0.9%生理盐水） ；1ml、 10ml 吸管、试管架、37 ℃温箱、离心机等 ;;实验前的准备; ②标准阳性血清冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。 ③标准阴性血清:冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。 3、被检血清 ①按常规方法采血分离血清 血清必须新鲜，无明显蛋白絮凝物、无溶血和无腐败气味。 ②运送和保存血清样品 防止血清冻结和受热，以免影响凝集价。若3d内不能送到实验室，可用冷藏方法运送血清。 ;抗原的稀释：将试管凝集抗原充分混匀后， 用0.9%生理盐水做10倍稀释，备用。 标准比浊管的制备：为了判定结果准确，应制备凝集反应标准比浊管，作为判定透明程度的依据，其配制方法如下：取凝集反应稀释后的抗原液再作对倍稀释，即2ml稀释抗原再加2ml盐水，混合后按下表配制。 ;“++++”液体完全透明，菌体呈伞状沉淀或块状颗粒状沉淀，呈100%凝集； “+++” 液体近于完全透明，菌体呈伞状沉淀，呈75%凝集； “++” 液体略微透明，菌体呈较薄伞状沉淀，呈50%凝集； “+” 液体不透明，管底有不很明显的伞状沉淀，呈25%凝集； “-” 液体不透明，无伞状沉淀。 [注]：效价：以产生 50%凝集的(++凝集程度)血清最高稀释倍数为受检血清的效价。 ;被检血清： 1、每份血清取9支小试管，放于试管架上。 2、血清稀释：第一只管加生理盐水2.4ml，第二只不加，第三只到第九只管各加0.5ml盐水。然后用1ml吸管取被检血清0.1ml加入第一管中，混匀后吸1ml加入第二、三管各0.5ml，第三管混匀后再吸0.5ml加入第四管，以此类推到第八管吸0.5ml弃掉。 ;3、加入抗原：取出之前稀释好的试管凝集抗原，然后从第二管开始每管加入0.5ml，加入抗原之后，血清的最终稀释倍数为从第二管开始1：50、1：100、1：200、1：400……1:1600，第一管为血清对照。然后充分混匀，放于37℃温箱中18-20小时后取出，在室温下放置1-2个小时观察结果。 阳性对照：加入1ml的生理盐水使其溶解（充分溶解使阳性血清的效价发挥到最大），稀释、加入抗原（方法、步骤同被检血清样本的操作）。 ;结果判定： 1、人血清中滴度为1：50(±)判定为可疑，滴度为1:100（+）及以上滴度判定为阳性。 2、牛、马、鹿、骆驼等大型动物血清滴度为1：100(+)及以上者判定为阳性，滴定为1：50(±)为可疑。 3、猪、羊(绵羊、山羊)、犬等小家畜血清滴度为1：50(+)及以上者判定为阳性，滴定为1：25(±)判定为可疑。 对可疑反应的人和动物应在10-25天内重复检查，复查时主要结合流行病学和临床表现而定，流行病学不成立者不必复查，复查主要目的是便于进一