第一讲 细胞生物学研究方法2.pptx

细胞生物学研究方法; ?细胞形态结构的观察方法 ?细胞组分的分析方法 ?细胞培养、细胞工程 ?用于细胞生物学研究的模式生物 ; ?光学显微镜技术（light microscopy） ?电子显微镜技术 (Electro microscopy) ?扫描探针显微镜（Scanning Probe Microscope） 扫描遂道显微镜 (scanning tunneling microscope ) 原子力显微镜 （atomic force microscope ） ; ?离心分离技术 ?细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 ?特异蛋白抗原的定位与定性 ?细胞内特异核酸的定位与定性 ?放射自显影技术 ?定量细胞化学分析技术 ?细胞电泳;? 细胞的培养 ? 细胞工程 ; ?普通复式光学显微镜技术（ light microscopy ） ?荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） ?激光共焦扫描显微镜技术（Laser Confocal Microscopy） ?倒置显微镜（ inverted microscope ） ?相差显微镜（phase-contrast microscope） ?微分干涉显微镜 （differential interference contrast microscope, DIC） ?录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy） ; ?电子显微镜的基本知识 ?电镜的基本构造 ?电镜与光镜的比较 ?电子显微镜的主要类型 ?扫描电镜（Scanning electron microscope，SEM） ?透射电镜（Transmission electron microscope，TEM） ?主要电镜制样技术 ; 分辨率是指区分开两个质点间的最小距离;;?原理与应用 ?直接荧光标记技术 ?间接免疫荧光标记技术 ?用于特异蛋白质等生物大分子的 定性定位： 绿色荧光蛋白(GFP)的应用 ;;;;?激光共聚焦扫描显微镜（laser confocal scanning microscope）用激光作扫描光源，逐点、逐行、逐面快速扫描成像，扫描的激光与荧光收集共用一个物镜，物镜的焦点即扫描激光的聚焦点，也是瞬时成像的物点。由于激光束的波长较短，光束很细，所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力，大约是普通光学显微镜的3倍。系统经一次调焦，扫描??制在样品的一个平面内。调焦深度不一样时，就可以获得样品不同深度层次的图像，这些图像信息都储于计算机内，通过计算机分析和模拟，就能显示细胞样品的立体结构。 激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态，也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的测量。;?原理 ?特点： 排除焦平面以外光的干扰，增强 图像反差和提高分辨率(1.4—1.7)， 可重构样品的三维结构。 ;;P53蛋白在细胞内位置变化;;倒置显微镜 Inverted Microscope 组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。;贴壁培养细胞观察;?相差显微镜（phase-contrast microscope） 将光程差或相位差转换成振幅差，可用于观察活细胞 ?微分干涉显微镜（differential-interference microscope） 偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成 明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。适于研究 活细胞中较大的细胞器 ?录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy） 计算机辅助的DIC显微镜可在高分辨率下研究活 细胞中的颗粒及细胞器的运动 ;电镜与光镜主要结构性能的比较;主要由4部分组成 电子