第十六章 干细胞与组织的维持和再生课件.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * (一)选择抑制细胞分化的培养体系 饲养层培养体系 条件培养体系 培养液中添加分化抑制因子体系 胚胎干细胞分离培养的基本程序 （二）早期胚胎的选择 （三）胚胎干细胞的分离 （四）胚胎干细胞的保持 （五）胚胎干细胞的鉴定 （六）胚胎干细胞的分化潜力验证 第三节 干细胞“干性”的调控机制 干细胞的独特增殖方式 表观遗传修饰参与调控干细胞的正常分化与发育 组蛋白共价修饰 DNA甲基化 miRNA的作用 一、细胞外信号分子通过调控细胞内一些重要转录因子来维持干细胞“干性” 二、干细胞“干性”的维持有赖于细胞内复杂的协同反馈调控网络 三、细胞外信号分子通过胞内重要的信号途径参与调控干细胞的自我更新与分化潜能 小鼠ES细胞“干性”的维持主要通过三个水平进行：第一是外源重要信号分子如LIF或BMP等，第二是转录调节因子主要包括Oct3/4、Nanog、Sox2，第三是调控细胞重要生命活动的重要基因的功能。 TGF-β/BMP和Wnt/β–catenin信号途径 干细胞“干性”的维持有赖于细胞内复杂的协同反馈调控网络 Nanog、Oct3/4以及Sox2在相同靶基因启动子区重叠出现的几率非常高。 Nanog、Oct3/4以及Sox2还能分别与各自的启动子结合，形成交互作用的自我调节网络，维持干细胞的未分化特性。 上述三种转录因子还存在自身负反馈调节机制。 个体出生以后，组织干细胞（包括生殖干细胞）生活的特殊微环境称为干细胞微环境，又称为干细胞巢（stem cell niche）。不同组织类型的“干细胞微环境”的组成及定位不同。 干细胞微环境是干细胞维持自我更新和分化潜能的重要场所 果蝇卵巢干细胞微环境 成年果蝇卵巢生殖干细胞（germline stem cell，GSC）位于卵巢原卵区的顶部，并被三种不同的基质细胞群所包绕：端丝(terminal filament)、帽细胞(cap cell)以及内鞘细胞（inner sheath cell）。这三种基质细胞以及基膜共同构成GSC微环境，其中帽细胞通过E-cadherin介导的紧密连接将GSC固定在微环境中，与其他基质细胞产生的细胞信号分子如BMP、Notch等共同调控GSC的生长和分化。 （一） 干细胞需要特殊的微环境才能执行正常的生理功能 骨髓干细胞微环境 （二） 干细胞微环境包括多种组成成分 信号分子:以自分泌或旁分泌的形式影响干细胞的增殖与分化。 细胞黏附分子:确保干细胞定居于微环境中，并接受信号分子的调节。 细胞外基质:对干细胞正常功能的维持提供了重要信号，并且可以直接调节干细胞的分化方向。 空间效应:空间结构对保持适宜的干细胞数目和干细胞的定向分化发挥了重要作用。 干细胞微环境共同结构 干细胞微环境由定位于组织内的一群特殊细胞和细胞外支持结构组成； 一些重要的信号分子定位于微环境中，干细胞微环境能够产生多种外源信号分子 一旦细胞分化启动，一部分子代细胞可以作为干细胞储备，另一部分则离开微环境终末分化 外胚层 中胚层 内胚层 呼吸系统上皮 消化道上皮 胰 肝 腺 甲状腺 甲状旁腺 软骨 骨 肌肉 血液 髓样组织 淋巴组织 泌尿生殖系统 疏松结缔组织 致密结缔组织 毛、齿 表皮 脑 神经管 腺 脊髓 甲、爪 * * * * * * * * 二 * * * * * * * * * * * * * * 第十六章 干细胞与组织的维持和再生 第一节 干细胞基础生物学第二节 干细胞的分离、培养与鉴定第三节 干细胞“干性”的调节机制 第一节 干细胞基础生物学 动物胚胎的三胚层代表不同类型细胞的分化去向 脊椎动物细胞分化示意图 一、干细胞是具有自我更新与分化潜能的未分化或低分化细胞 干细胞具有“无限” 的增殖能力，能够产生与母代细胞完全相同的子代细胞，维持该干细胞种群。 自我更新 分化潜能 干细胞能分化生成不同表型的成熟细胞，例如胚胎干细胞可以分化形成个体的所有成熟细胞类型。 干细胞(stem cell) 按分化潜能的大小,干细胞可分为三类: 二、干细胞具有不同的分类方法 全能干细胞 能够形成整个机体所有的组织细胞和胚外组织的干细胞，它们可以分化为个体的所有细胞类型。 例如 受精卵和早期胚胎细胞 多能干细胞 能够分化形成多种不同细胞类型的干细胞，显示出多系分化潜能的特征。 间充质干细胞的体外诱导分化 单能干细胞 通常指特定谱系的干细胞，它们仅产生一种类型的分化细胞，因此分化能力较弱。 例如表皮干细胞只能分化成为皮肤表皮的角质形成细胞，心肌干细胞只能发育为心肌细胞。 受精卵 各器官细胞 全能细胞 多能细胞 单能细胞 各胚层细胞