液质联用原理和应用.ppt

残留、法医学和环境样品测定 专家指出，中国入世后，食品工业最大的问题就是安全壁垒，这将给中国的进出口和国内企业带来极大的威胁。美国食品与药品管理局 (FDA)、欧盟、日本、韩国等主要贸易国和地区公布了在进口动物源性食品中禁止使用的药物名单，提高了最高限量标准。这就要求中国加强农、畜、水产品中的农药、兽药等残留的控制和检测。 同样随着人类对生存环境的倍加关注，要求对环境中各种污染物、有害或有毒物以及法庭科学中毒物、滥用药物等进行更加严格的监控。而配以ESI、APCI和APPI离子化技术的LC/MS/MS以分析速度快、灵敏度高、特异性好等特点广泛应用与残留和毒物分析。目前已成功地进行数百种农药、兽药、抗生素、兴奋剂类残留和毒物、毒素如氯霉素、磺胺类、硝基呋喃类、毒品、多环芳烃等等化合物的检测。 下面讲解应用示例 高效液相色谱――电喷雾串联质谱法测定清开灵复方中胆酸 采用HPLC/MS/MS技术，从清开灵注射液中，通过分子量、二级质谱碎片信息定性测定了清开灵复方中的胆酸。 直接进样实验。清开灵注射液经过初步化学处理后采用电喷雾（ESI）离子源，在负离子扫描方式下，得到一极质谱图、即分子离子峰[M-H]-，再用二级质谱（MS/MS）扫描目标分子离子的碎片峰。再以相同的实验条件对标准品进行测定，做出其一级、二级质谱图。 通过对样品进行分子离子峰的扫描发现[M-H]-的峰中有一个很强的407，根据样品处理过程以及对复方各单味药材的研究，其应该为一有机酸的负离子峰，并初步推断其为胆酸。（胆酸的分子量为408）。如图所示：通过对照样品(右)和标准品（左）的二级质谱图，发现其主要碎片峰均吻合较好。 如何用API LC-MS/MS检测硝基呋喃类代谢物 第一步：配制衍生化后的硝基呋喃代谢物标准溶液，乙腈/水体系，浓度10PPM 确认仪器已经校准，气体、电压工作正常。 测试条件： 离子化方式: ESI+ 进样5ul/min， Q1 SCAN 观察M/Z 335，236，249，209及同位素内标峰，通过调节DP，使这几个峰最强。 注意：1如买来的是已经衍生化的标准品，则可四种混配。 2如是用户由硝基呋喃代谢物衍生化的，最好四种分别配制，要求Q1 SCAN能明显观察到上述 离子。下图是一个用户的混标，只看到335和209。 第二步：以第一步测得值为母离子，做PRODUCT ION SCAN（MS2），调节CE等参数，使母，子离子都具有一定强度，平滑后得到MS2谱，从各母离子中各选择2个最高的子离子，分别为呋喃它酮AMOZ： M/Z 291，262；呋喃唑酮AOZ： M/Z 134，104；呋喃妥因AHD： M/Z 134，104或178；呋喃西林SEM： M/Z 192，166，准确到0.1。注意：母离子要采用Q1SCAN测得值，子离子采用PRODUCT ION SCAN测得值。典型MS2谱图如下 AMOZ AMOZ-D5 AOZ AHD AHD内标（选252/134 ） SEM内标（选212/195） 第三步：以第二步选定的离子对，例如335.1/262.2 等，做MRM SCAN 。 第四步：通过软件操作优化各种参数，如温度、气流等。 第五步：接好色谱柱，编辑LC梯度洗脱，进样，观察色谱峰形及保留时间是否合适，否则调节流动相，优化色谱条件。 第六步：用空白提取液配制同样浓度标样，按上一步方法进样，观察色谱峰形及保留时间是否合适，峰高有无变化，有无离子抑制现象，否则调节流动相，优化色谱条件。 第七步：用空白提取液配制一系列不同浓度硝基呋喃代谢物标样，按上一步方法进样，例如，分别稀释为浓度0.25ug/kg, 0.5ug/kg, 1.0ug/kg, 2.0ug/kg, 4.0ug/kg, 8.0ug/kg, 等等。  第九步：按上述方法采集数据，做标准曲线,并进行硝基呋喃代谢物样品的测定。如果4种同位素内标齐全，则定量时一一对应计算，如只有AOZ-D4和AMOZ-D5，则1种内标可对应2种硝基呋喃代谢物。 SEM结果1 SEM线性 知识回顾Knowledge Review 分子量测定中的误判 溶剂中的杂质 来自于塑料添加剂的峰 样品容器不干净，常见表面活性剂的峰 进样系统污染 样品在源内碎裂，形成碎片离子 LC-MS中常见的本底离子 m/z 50-150, 溶剂离子，[(H2O)nH+ ，n= 3-112] m/z 102, H+乙腈 +乙酸, C4H7NO2H+,102.0549 m/z149, 管路中邻苯二甲酸酯的酸酐, C8H4O3H+,149.0233 m/z 288, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 279, 管路中邻苯二甲酸二丁酯 C16H22O4H+, 279.1591 m/z