实验二 蛋白质等电点及含量测定.pptVIP

1 实验二 蛋白质等电点及含量测定 1台可见光分光光度计配套4个玻璃比色杯，用完务必立即洗净、晾干。切忌用试管刷或粗糙布(纸)擦拭。 实验结束后，务必将使用过的玻璃器皿洗净、晾干、放回原处。 【温馨提示】 P40/P51 2 学习蛋白质的两性解离性质，掌握pH值法测定蛋白质等电点的一般原理和操作方法。 学习和掌握双缩脲法测定蛋白质浓度的原理和操作方法。 【实验目的】 蛋白质等电点的测定 4 【实验原理】——pH值沉淀法测定蛋白质等电点 蛋白质是两性电解质，在溶液中存在如下平衡： 5 蛋白质分子所带净电荷为零时的pH值称为蛋白质的等电点（pI）。在等电点时，蛋白质分子在电场中不向任何一极移动，而且分子与分子间因碰撞而引起聚沉的倾向增加，所以这时可以使蛋白质溶液的粘度、渗透压均减到最低，且溶液变混浊。 牛乳中的酪蛋白的等电点是4.7-4.8。本实验采用蛋白质在不同pH溶液中形成的混浊度来确定，即混浊度最大时的pH值即为该种蛋白质的等电点值。 【实验原理】——pH值沉淀法测定蛋白质等电点 6 实验仪器 4支15mL玻璃试管、移液管、吸耳球、移液枪（200uL）、枪头（200uL）等。 实验材料和试剂 蒸馏水、1M醋酸、0.1M醋酸、0.01M醋酸、酪蛋白溶液。 【仪器试剂耗材】 ——pH值沉淀法测定蛋白质等电点 7 【操作步骤】——pH值沉淀法测定蛋白质等