啤酒发酵工艺流程图.docVIP

. . word版本 实验一 单细胞蛋白（SCP）的生产 一、实验目的 了解单细胞蛋白的开发优势及技术现状。 掌握单细胞蛋白的液体深层培养法及工艺控制规律。 了解发酵过程中菌体浓度及生物量的一般检测方法。 二、实验原理 所谓SCP（Single Cell Protein）就是指那些工厂化大规模培养、作为人类食品和动物饲料的蛋白质来源的酵母、细菌、放线菌、霉菌、藻类和高等真菌等微生物的干细胞。SCP工业，主要是饲料酵母工业。酵母是一种单细胞微生物，生长繁殖快，菌体营养丰富。饲料酵母是一种营养价值很高的蛋白饲料，成品呈微黄色粉末状，具有酵母特殊香味。酵母蛋白质含量一般都在70%左右，比大豆高1倍。与肉蛋白、鸡蛋蛋白、大豆蛋白相比，单细胞蛋白所含的氨基酸组分齐全，有18-20种氨基酸，尤其是谷物中所缺乏赖氨酸含量较高。此外，维生素含量也十分丰富。每千克酵母类单细胞可使奶牛的产奶量增加6-7㎏，用含有10%单细胞蛋白饲料养鸡，产蛋提高21%-35%。1吨单细胞蛋白可节约5-7吨饲料粮，可产1.5吨鸡肉或3万枚鸡蛋。我国单细胞蛋白（酵母）年产量近3万吨，多用于医药、面包生产和饲料。用于生产饲料酵母的原料来源广泛，有矿物资源（如石油、甲烷、泥炭等）、纤维资源（如秸杆、木屑等）、糖类资源（如糖蜜、红薯等）、石油二次制品、废弃资源（包括有机废水、废渣、动物粪便等）。从我国目前的情况出发，生产饲料酵母等单细胞蛋白值得优先开发的原料有废糖蜜、薯干、纸浆废液，豆制品厂、味精厂、淀粉加工厂的废液等，用这些原料生产饲料酵母，首先是产品无毒性，另外也有利于解决工厂和城市的污染问题。 酵母细胞的发酵特点：目前，最广泛用于生产作为蛋白资源的酵母是假丝酵母，该酵母生长繁殖速度快，每2-4小时可繁殖一代，培养10小时左右就能繁殖到种子菌体量的15倍。发酵过程中，要保证罐内的液体混合良好和较适当地提供氧气，还要控制好温度和pH。采用流加间歇发酵可以保证糖被具有良好活性的酵母呼吸消耗，以达到最适产量。底物浓度过高，即使在有氧条件下，酵母也会发酵产生碳水化合物。如果酵母生长速率过快，底物也会发酵。因此，在培养过程中，底物浓度应维持在一定较低的水平，并维持一定的通风量。 酵母生物量的检测方法及分离：最普遍的检测方法是细胞干重法、显微镜记数法和光密度法。菌体的分离常采用过滤法和离心分离法。 三、实验仪器与材料 （一）仪器 10L发酵罐、恒温培养箱、超净工作台、显微镜、大容量冷冻离心机、 （二）材料 菌种：热带假丝酵母（Candida tropicalis）, 由中国科学院微生物研究所提供。 葡萄糖、蛋白胨、饴糖、牛肉膏、NaCl。 （三）培养基配方 斜面培养基：酵母膏1.0%，蛋白胨2.0%，葡萄糖2.0%，琼脂1.5%，pH6.0。 摇瓶培养基：葡萄糖3.0%，蛋白胨1.0%，氯化钠0.5%，牛肉膏0.3%，pH自然。 发酵培养基：饴糖2.0%，葡萄糖3.0%，蛋白胨1%，酵母浸汁1.0%，K2HPO3 0.3%，牛肉膏0.5%，NaCl 0.5%，pH自然。 四、实验步骤 （一）斜面种子的制备 于超净工作台面上，在火焰保护下，用无菌接种棒挑取酵母菌少许，于斜面培养基内，先划中线，后从下而上往两边划线均匀地铺开，塞好棉塞。扎好后，放25-30oC恒温箱中培养（斜面朝下放），培养4-6天。 （二）摇瓶种子的置备 刮下斜面酵母少量，接种于摇瓶培养基内，置摇床上，于28oC恒温摇床240rpm培养24h。 （三）发酵罐发酵培养 在10L发酵罐中装入配好的发酵培养基（配料体积6L，消后体积6L），用饱和蒸汽对发酵罐进行实罐消毒，冷却后接入摇瓶种子（接种量 （四）罐上各传感器的标定及灭菌操作 （五）发酵罐工艺控制要点 发酵全程罐温控制在28±1oC，中后期温度可以适当降低些； 周期为72-96h，罐压保持在0.03-0.04Mpa，搅拌速度控制在200rpm； 空气流量控制在1.5VVM（VVM，即单位时间内（min）通过单位体积（m3）发酵液的空气体积（m3））左右； 补料控制:发酵过程中可根据残糖量适当补入含饴糖及葡萄糖的料液1-2次； （六）中间控制操作要求 0～48h：每隔6h取样，测细胞数（采用血球记数板记数）、pH、总糖、氨基氮，并作好记录。涂片镜检，观察菌体形态，并作好记录。观察发酵液外观、粘稠度、气味等，并作好记录； 48h～放罐：每隔12h取样，观察发酵液外观、颜色、粘稠度，测pH、总糖、氨基氮、生物量（1500rpm,10min，收集菌体，干燥，称重），并作好记录； 取样的操作要求同实验22； 每0.5h观察并记录一次：罐温、罐压、搅拌转速。 （七）发酵液的处理 放罐后发酵液采用离心分离法收集菌