Waters高效液相色谱维护与保养精编PPT课件.pptVIP

示差折光检测器原理 检测器的光路是由光源、凸镜、检测池、反射镜、平板玻璃、双光敏电阻等主要部件组成，检测池有参比，测量两个池室，它们对光路来说是串联的。 示差检测器原理 第四部分色谱柱的维护与保养 1、钙柱：此色谱柱由钙基树脂填装而成，氢离子或其它离子会取代钙离子，或是引起与柱中糖的转换，尤其是像蔗糖这样易于转换的糖，因此推荐在流动相中加入一定量的钙离子不保持平衡和防止与样品的转换。要保持装流动相的瓶子干净，有盖子，且新鲜，流动相需要每24小时重新配制。 新的钙柱使用注意事项 2新色谱柱的使用：为了保证新柱子能在分析使用之前得到足够的钙离子的平衡 1）将柱子按照通常使用的反方向安装（标签上的箭头指向柱子的入端口）； 2）用至少100ml的0.001M EDTA钙盐溶液在90℃ 用0.5ml/min流速反冲柱子，500mg/L的钙盐的浓度大约为0.001M； 3）将柱子反过来（回到通常的流动方向）用分析所用流动相冲柱子，（用与上一上步骤同样的条件）直到基线平稳方可使用。 钙柱再生的时间 3、柱子再生的时间：根据相关的样品含有较多重金属和过渡金属元素或是有机酸的样品越是需要经常地对柱子进行再生，因为它们会与柱子发生转换。检测是否需要再生可以通过注射蔗糖来测试柱子的置换，如果蔗糖的峰有明显拖尾，那么柱子需要做以下处理： 第四部分色谱柱的维护与保养 4柱子的再生步骤： 1）?配制500ml的再生溶液（500mg EDTA_Ca/L2）?把柱子流路方向反过来，在90℃下以0.5ml/min的流速冲洗一整夜；3）?再生之后回到正常方向使用。当柱子反冲时，很重要的一点是需要保持溶剂的温度从而确保正确的冲洗，用冷的溶剂将会延缓冲洗的过程。 使用钙柱注意的事项 5、通常推荐压力不超过2000psi，最大流速不超过0.6ml/min(70℃)。⊙不要在流动相中使用氯化钙，硝酸钙以及其它强酸的钙盐，这样会腐蚀柱子，破坏填料。 ⊙柱子的温度不要超过95℃。通常高温会带来高的分辨率，但在90~95℃之间几乎没有变化，70℃以下对许多糖的异构体的分离不能提供足够的分离度，对于乙醇的定量，柱温应在75℃ KS-802钠型柱新色谱柱 钠型柱以ks802柱子为代表： 1、新色谱柱的使用：为了保证新柱子能在分析使用之前要得到足够的钠离子的平衡 1）将柱子按照通常使用的反方向安装（标签上的箭头指向柱子的入端口）； 2）用至少100ml的0.002M NAOH溶液在50℃ 用0.2ml/min流速反冲柱子，4h以上。  3）将柱子反过来（回到通常的流动方向）用分析所用流动相冲即无二氧化碳的纯水冲洗柱子，（用与上一上步骤同样的条件）直到基线平稳方可使用。 KS-802色谱柱再生的时间 柱子再生的时间：根据相关的样品含有较多重金属和过渡金属元素或是有机酸的样品越是需要经常地对柱子进行再生，因为它们会与柱子发生转换。检测是否需要再生可以根据注入木糖标样或进行测试柱效时用到的2.5%乙二醇来检测，如有明显拖尾或者柱子理论踏板明显降低那么柱子需要做以下处理： KS-802色谱柱的再生 柱子的再生步骤： 1）?配制500ml的再生溶液（0.2mol/LNAOH溶液2）?把柱子流路方向反过来，在35℃、0.2ml/min的流速冲洗一整夜；3）?特别注意用水冲洗系统的时候，一定先把砂芯过滤头先放入纯水超声，冲洗至ph中性为止，然后再生之后回到正常方向，用无二氧化碳的纯水同样的条件冲洗至ph中性为止。 使用钠型柱时注意事项 ： 通常推荐压力不超过600psi，最大流速不超过1.0ml/min(80℃)。⊙进样前一定要把样品过滤，然后再进样，禁止进样强酸 的样品，这样会腐蚀柱子，破坏填料。 ⊙晚上不测样品时一定要把柱子的温度降至 40 ℃以下，流速0.2ml/min如果只降流速不降温，那么很不幸的告诉你，你的色谱柱填料会在很短的时间内被烤至塌陷、分离度降级、报废！ 经验：如果色谱柱再生后。把它放入冰箱冷藏一段时间，然后再使用会起到意想不到的效果！ 谢谢！ -- 减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时尤为重要 -- ，避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀 * Waters液相色谱维护保养 以下课件是我在使用、操作、高效液相色谱仪十年中积累的经验，以及集合外部学习的经验所写，如有讲的不好、错误之处，请大家及时指出，我们共同学习！ 质检： Waters高效液相色谱常见故障与解析 第一部分常用术语 第二部简述HPLC的组成 第三部分主要讲液相常见故障与解析| 第四部分简谈示差检测的原理 第五部分：色谱柱的维护与保养 第一部分术语 1、液相色谱法：就是用液体作为流动相的色谱