《生物制药》酶类药物解读.pptVIP

你们好 第三节、重要的酶类药物 超氧化物歧化酶是一种重要的氧自由基清除剂，作为药用酶在美国、德国、澳大利亚等国已有产品。由于SOD能专一性去除超氧阴离子自由基，故引起国内外生化界和医药界的极大关注。 目前临床上应用集中在自身免疫性疾病上如类风湿关节炎，红斑性狼疮，皮肌炎等 三、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase, SOD） 稳定性 对热稳定：天然牛血SOD可75℃加热数分钟，对热稳定性与溶液离子强度有关 对pH的稳定性：一般pH5.3~9.5较稳定，猪血SOD在pH7.6～9较稳定。 吸收光谱 1.SOD的性质 结构特点：金属酶 Fe-SOD: Mw38000，2个亚基，每个亚基含1个Fe，存在 于 中 Cu、Zn-SOD: Mw32000，2个亚基，每个亚基含1个Cu，1个 Zn，存在于 中 Mn-SOD: 原核细胞中，Mw40000,2个亚基，每个亚基1个Mn 真核细胞中，Mw80000，4个亚基，每个亚基1个Mn 真核细胞 原核细胞 金属辅基与酶活性关系 Cu、Zn-SOD：Zn与分子结构有关，与催化活性无关;Cu与活性有关，对酶活力是必需的 Mn-SOD：Mn对酶活力是必需的 Fe-SOD：Fe对酶活力是必需的 2.生产工艺 分离纯化SOD常根据原料，种类和性质的差异而有所不同。 （1）以牛血红细胞提取Cu、Zn-SOD的工艺 （2）工艺过程： 1）收集、浮选 取新鲜牛血，离心除去血浆。 2）溶血、去血红蛋白：干净红细胞加水溶血30min，然后加入0.25倍体积的乙醇和0.15倍体积的氯仿，搅拌15min，离心去血红蛋白，收集上清液。 3）沉淀、热变性：将上述清液加入1.2～1.5倍体积的丙酮，产生大量絮状的沉淀，离心得沉淀物。再将沉淀物加适量水，离心去不溶物，上清液于60～70℃热处理10分钟，离心去沉淀得浅绿色得澄清液。 4）柱层析、洗脱、超滤浓缩：将上述澄清液超滤浓缩后小心加到已用2.5mmol/L，pH7.6磷酸缓冲液平衡好的DEAE－sephadex A50柱上吸附，并用pH7.6的2.5～50mmol/L的磷酸盐缓冲液进行梯度洗脱，收集具有SOD活性的洗脱液。 5）冷冻干燥 （2）以牛肝为原料提取Mn-SOD的工艺 二、胃蛋白酶（Pepsin ） 胃蛋白酶：是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细胞（gastricchiefcell）所分泌，功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段。 胃蛋白酶也是第一个从动物身上获得的酶。 自猪、牛、羊等胃粘膜提取的胃蛋白酶用作助消化药。常与稀盐酸同时用于幼畜消化不良性腹泻和慢性萎缩性胃炎。 临床上主要用于因食蛋白过多，引起的消化不良及病后恢复期消化机能减退等。 1、组成（结构）、性质 胃中惟一的一种蛋白水解酶。其最适pH值为1～2。 胃蛋白酶作用的主要部位是芳香族氨基酸或酸性氨基酸的氨基所组成的肽键。 药用胃蛋白酶是胃液中多种蛋白水解酶的混合物，含有胃蛋白酶，组织蛋白酶，胶原酶等，为粗制的酶制剂。 性状：外观为淡黄色粉末 2、生产工艺 （1）工艺路线： 猪胃粘膜 自溶液 上清液 成品 自溶，过滤 H2O, HCl 氯仿 脱脂 浓缩干燥 （2）工艺过程： ①自溶、过滤 在夹层锅内预先加水100L及盐酸，加热至50℃时，加入200kg猪胃粘膜，快速搅拌使酸度均匀，保持45~48℃,消化3~4小时。用纱布滤去未消化的组织蛋白，收集滤液。 ②脱脂、去杂质 将滤液降温至30℃以下，静防24~48h，使杂质沉淀除去，得到脱脂酶液。 ③浓缩干燥 取脱脂酶液，在40℃以下浓缩到原体积的1/4，真空干燥，球磨，得到产品。 三、尿激酶（Urokinase ） 尿激酶是一种碱性蛋白酶，由肾脏产生，主要存 在于人和哺乳动物的尿中。人尿平均含有5~6U/ml。 临床上，尿激酶已经广泛应用于治疗各种新血栓形成或血栓梗塞疾病。 1.组成性质 （1）尿激酶有多种分子量形式，主要有31300、54700两种。尿中的尿胃蛋白酶原在酸性条件下可以激活生成尿胃蛋白酶，后者可以把分子量54700的天然尿激酶降解为分子量为31300尿激酶。 （2）尿激酶是专一性很强的蛋白水解酶，血纤维蛋白溶 酶原是它唯一的天然蛋白质底物，它作用于精氨酸－缬氨酸键使得纤溶酶原转为纤溶酶。 （3）尿激酶的pI为pH8-9. 2.生产工艺 (1)工艺路线： 男性尿液 10℃pH8.5 上清尿液