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蝈蝈不同发育期过氧化物酶同工酶的研究 论文摘要：利用垂直板型聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）对蝈蝈（Gampsocleis gratisa Brunner Von Wattenwvl）不同发育期的过氧化物酶（POD）同工酶进行了比较研究。结果表明，不同发育阶段的蝈蝈，其过氧化物酶同工酶谱在酶带数、迁移率、酶量（酶带宽窄）及酶活性（酶带深浅）等方面均存在相似性，但也有一定的差异。以此为基础，进一步探讨了过氧化物酶同工酶在蝈蝈个体发育过程中表达的相似相异性,为以后蝈蝈的虫态鉴定及昆虫分类提供一定的依据。 论文关键词：蝈蝈,过氧化物酶,同工酶 蝈蝈，属直翅目，螽斯科。其成虫和幼虫可对农作物幼苗造成危害，影响农作物生长发育，是一种危害型昆虫。但因其美妙动听的叫声，被人们称为乡谣俱乐部。蝈蝈是螽斯科中最受大家喜爱的鸣虫，南方又称哥哥。蝈蝈为渐变态昆虫，一生要经历卵、若虫、成虫3个阶段。卵多产于植物组织中，或成列产于叶边缘或茎干上，一般不产在土中，若虫需蜕皮5-6次才能变成成虫。成虫植食性或肉食性，也有杂食种类，多栖息于草丛、矮树、灌木丛中，善跳跃。雄虫体长35-38mm，前翅长14-17mm，雌虫体长35-52mm，前翅长6-8mm。体翠绿或黄褐色。触角长达60mm。前胸背板宽大，下缘黄色，胸部腹板各具一对锥状突起，后胸的突起最大。足跗节4节，第1-3节有垫，后足第一跗节跗垫分为两叶。后足腿节比胫节稍长，胫节有6个端距。 应用同工酶技术不仅可以鉴别物种，而且可以揭示类群的遗传结构，阐明类群的亲缘关系等。 过氧化物酶是一种以过氧化氢（HO）作为电子受体催化底物的氧化作用的酶，是目前研究较多且较为清楚的氧化酶类。它在生物体的不同器官、组织、不同发育时期以及不同的代谢条件下普遍存在。在动物体内，不同发育时期过氧化物酶的种类和活性都有差别。由于过氧化物酶同工酶亦是基因表达的产物，通过对其酶谱的分析能够比较直接地判断基因的存在及其表达规律，因而可以从分子水平上揭示物种的遗传基础，这一点在品种的鉴定、起源、进化和分类等方面已有诸多应用。 本试验采用垂直板型聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（PAGE）对蝈蝈的卵﹑幼虫和成虫的过氧化物酶同工酶进行分析研究，初步确定各发育期内过氧化物酶的种类和活性，以期为今后蝈蝈的虫态鉴定和各发育期内的生理变化研究提供一定的依据。 1材料和方法 1.1实验材料 本实验以蝈蝈的卵、不同发育期的幼虫和成虫为实验材料，材料均由河北科技师范学院农学系植物保护实验室提供，如表1所示。 表1蝈蝈不同发育期的材料 序号12345678910 发育期卵1龄幼虫2龄幼虫3龄幼虫4龄雄幼虫4龄雌幼虫5龄雄幼虫5龄雌幼虫雄成虫雌成虫 1.2试剂 分离胶缓冲液、分离胶贮液、浓缩胶缓冲液、浓缩胶贮液、0.14％过硫酸铵、40％蔗糖、核黄素、乙二胺四乙酸（TEMED）、Tris-Gly电极缓冲液（pH8.3）、0.1％溴酚蓝、过氧化物酶显色剂等。 1.3仪器 GL-20G-Ⅱ型高速冰冻离心机、RXZ型智能人工气候箱、层析冷柜、电子天平（千分之一，万分之一）、DYY-Ⅲ型直流稳压电泳仪、24A型垂直板电泳槽、微量进样器（50、100L）、移液枪、烧杯等。 1.4方法 1.4.1样品的制备将卵、幼虫和成虫按照1:2的比例加入0.01M磷酸缓冲液（pH7.4），冰浴研磨。将匀浆转入离心管中，4℃、10000rpm离心5min，取上清液保存于冰箱中备用。 1.4.2凝胶制备凝胶的制备根据文献[8]的方法进行设计，略有改动（主要是配药数据的改动）。 1.4.2.1分离胶制备按表2比例配制分离胶。 表2分离胶制备 贮液名称分离胶缓冲液分离胶贮液过硫酸铵水 体积比例1241 双面槽用量（ml）918367 1.4.2.2隔层胶制备按表3配制隔层胶溶液。 表3隔层胶制备 贮液名称浓缩胶缓冲液浓缩胶贮液核黄素40%蔗糖 体积比例1412 双面槽用量（ml）41648 1.4.3电泳采用垂直板型聚丙烯酰胺凝胶电泳法。每槽加样量为30L。于层析冷柜（4℃）中电泳。电泳电压为200V，电流为30mA。电泳全过程约为5h。 1.4.4染色过氧化物酶同工酶染色用醋酸-联苯胺法，染色时间依酶带显现程度而定。随后倒出染液，用蒸馏水漂洗三次。脱色后拍照，画图。求出各谱带的迁移率Rf（Rf=酶带移动距离/指示剂移动距离）。 2结果与分析 2.1过氧化物酶同工酶酶谱的分析 根据凝胶电泳显示的过氧化物酶同工酶酶谱（图1）绘制模式图（图2）。酶带深浅表示酶活性大小，酶带宽窄表示酶量多少。各酶带迁