非发酵菌的培养和鉴定.pptVIP

结果判读：在金黄色葡萄球菌菌落附近的嗜血杆菌菌落较大，较远处菌落渐小，甚至无菌生长。可初步认定为嗜血杆菌属。 血平板卫星现象阳性 嗜血杆菌鉴定实验：“卫星现象” MH平板卫星现象阳性 嗜血杆菌鉴定实验：“卫星现象” Ⅴ+Ⅹ因子 Ⅹ因子 Ⅴ因子 溶血 葡萄糖 蔗糖 乳糖 甘露醇 触酶 流感嗜血杆菌 + - - - + - - - + 副流感嗜血杆菌 + - + - + + - + V 杜克嗜血杆菌 + + - - - - - - - 嗜血杆菌生化鉴定反应结果 嗜血杆菌主要生化反应结果 临床常见的非发酵菌主要包括：铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、鲍曼不动杆菌。 非发酵菌的生化鉴定反应选择比较复杂，共选的反应主要有：氧化酶、克氏双糖铁、半固体、硝酸盐还原、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸脱羧酶，根据可疑的细菌选择乙酰胺、甘露醇、木糖等相应的补充生化鉴定实验。 总 结 嗜血杆菌属，因为其生长营养要求高，需要特殊的Ⅹ因子和(或)Ⅴ因子，所以在血平板上不生长，只有在巧克力平板上生长。 嗜血杆菌属的鉴定采用血平板和MH平板上观察特殊的“卫星现象”来进行。 总 结 总 结 常见非发酵菌主要生化反应结果 　 氧化酶 KIA 动力 葡萄糖O/F 枸橼酸盐 硝酸盐还原 赖氨酸脱羧酶 鸟氨酸脱羧酶 精氨酸脱羧酶 乙酰胺 甘露醇 麦芽糖 木糖 底层 斜面 产气 H2S 铜绿假单胞菌 + K K - - + O　 + + - - + + / / / 嗜麦芽窄食单胞菌 - K K - - + O - + + - - / - + / 洋葱伯克霍尔德菌 V K K - - + O + + + V - / + + / 醋酸钙鲍曼不动杆菌复合群 - K K - - - O + - - + / / / + V：不确定；O：氧化型；/:常规不选择 非发酵菌和嗜血杆菌的培养和鉴定 苏州大学附属第二医院 微生物室 周惠琴 非发酵菌和嗜血杆菌的培养和鉴定 实验目的 实验内容 操作步骤 结果观察 1 2 3 4 一.实验目的 掌握常见非发酵菌的菌落特点、染色形态及生化反应鉴定实验。 掌握嗜血杆菌属的菌落特点及鉴定实验。 二.实验内容 1.铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、鲍曼不动杆菌使用四区划线法接种于血琼脂、巧克力琼脂平板上，在浓度为5%的CO2，35°C孵育箱中培养18-24h后观察两种平板上各菌落形态特点，并进行生化反应鉴定和结果判读。 2.流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌使用四区划线法接种于巧克力平板上，在浓度为5%的CO2，35°C孵育箱中培养18-24h后观察两细菌的菌落形态和特点。 3.利用“卫星现象”对嗜血杆菌属进行鉴定。 克氏双糖铁（KIA） 半固体（动力） 枸橼酸盐（CIT） 穿刺后斜面划线 垂直穿刺 斜面划线 硝酸盐（NIT） 液体接种 (非）赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸脱羧酶、氨基酸脱羧酶对照 非发酵菌生化反应的选择 氧化酶试剂 待测菌落 氧化酶阳性 氧化酶实验 操作步骤：使用无菌滤纸，蘸取待测细菌单个菌落→滴加配制好的氧化酶试剂→3-5秒钟后观察结果。 结果判读：出现红色为阳性，不变色为阴性。 非发酵菌生化鉴定反应共选“套餐” 斜面产碱，底层不变 H2S阴性K/K，H2S- 斜面产酸，底层产酸产气， H2S阴性（A/A,气体+，H2S-） 斜面产碱，气体阴性，H2S阳性（K/A,气体+，H2S+） 动力实验 左管阳性，右管阴性 枸橼酸盐利用实验 上管阳性，下管阴性 氨基酸脱羧酶实验 赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阴性，精氨酸脱羧酶阳性 各生化管阴阳性结果的判读 革兰阴性杆菌菌体细长，长短不一，大小为(1.5-5)μm×(0.5-1)μm，有时呈球杆状或纹状，成对或短链状排列，有单鞭毛。 铜绿假单胞菌(P.aeruginosa) 在血平板上形成大而扁平，湿润的灰绿色或蓝绿色菌落，边缘不齐，似毛玻璃样，菌落呈现金属光泽，有生姜味，常有透明溶血环。 铜绿假单胞菌在血平板上的菌落形态 铜绿假单胞菌(P.aeruginosa) 1.典型型：菌落形态不规则，边缘呈伞状延伸。 铜绿假单胞菌(P.aeruginosa) 铜绿假单胞菌在血平板上的菌落形态 2.大肠型菌样型：菌落圆形凸起，灰白透明，似大肠埃希菌菌落。 铜绿假单胞菌(P.aeruginosa) 铜绿假单胞菌在血平板上的菌落形态 3.粗糙型：菌落呈纽扣状，表面粗糙或菌落中央隆起边缘扁平。 铜绿假单胞菌(P.aeruginosa) 铜绿假单胞菌在血平板和巧克力平板上的菌落形态