基因组物理图谱的构建.pptVIP

基因组物理图谱的构建 概述 为什么要进行物理作图？ 遗传学图谱分辨率有限 遗传学图的分辨率依赖于得到的交换的数目。对于人类与大多数真核生物来说，巨大数量的后代不易获得。 遗传学图谱精确度有限 物理作图是采用分子生物学方法直接将DNA分子标记、基因或克隆标定在基因组上的实际位置。 遗传图和物理图的相互参考是进一步精确认识基因组的基础。 物理图谱的常用的制作方法，可分为以下四类： 1.限制性作图 2.DNA大片段重叠克隆的基因组作图 3.荧光标记原位杂交作图 4.序列标签位点作图 染色体 DNA 作图文库 物理图谱 大分子DNA的提取 大片段DNA的克隆 物理作图 物理作图的主要环节 限制性作图 定义：将限制性酶切位点标定在DNA分子的相对位置。 局限性：主要适合对小基因组的原核生物和大片段进行限制性位点分析。 限制性作图的基本原理 比较一种DNA分子被不同限制性内切酶切割所产生的片段大小。 首先用一种酶处理样品后，电泳确定DNA片段的大小。 然后用第二种酶处理，获得第二组片段。 最后用两种酶混合处理，获得第三组片段。 收集上述资料进行对比组装。 两种酶切位点交替出现的区段用加减法确定其的相对位置。 连续出现2个或多个相同酶切位点的区段，采用部分酶解法。 切点过多时可以采用末端同位素标记结合部分酶解进行绘图。 限制性作图的规模受限于限制性片段的大小