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微生物检测基本操作流程 灭菌 2、高压蒸汽灭菌 j.打开高压杀菌锅。注意必须使灭菌釜内无压力为宜。 k.灭菌后的物品冷却至室温，取出。 l.打开出水阀门，放尽釜内剩水。 (5) 注意事项 高压灭菌器上的安全阀，是保障安全使用的重要机构，不得随意调节。灭菌过程中也不要随意移动灭菌锅。 微生物知识培训 目录 什么是微生物 1 实验室工作菌种及鉴别 2 工作菌种的传代培养 3 实验室清洁消毒方法 4 指一群个体微小，直径通常小于0.1mm的，构造简单（单细胞，简单的多细胞，有的不具细胞结构）的微小生物体。 什么是 微生物？ 认识微生物 微生物分类 革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌 比较项目 G+细菌 G- 细菌 1.革兰氏染色反应 呈结晶紫的紫色 复染而成红色 2.肽聚糖层 厚，层次多 薄，一般单层 3.磷壁酸 特有 无 4.外膜（外壁层） 无 有 5.脂多糖 无 特有 6.类脂和脂蛋白含量 低，仅抗酸性细菌含类脂 高 7.对机械力的抗性 强 弱 8.对青霉素和磺胺 敏感 不敏感 9. 产毒素 以外毒素为主 以内毒素为主 大肠杆菌（G-） 大肠杆菌 放线菌 棒状杆菌 黑曲霉 黑曲霉 弧状菌 分裂的大肠杆菌 形态染色： 单个菌体呈球形，呈葡萄串状排列，直 径平均0.8 μm，G+菌，无鞭毛，无芽孢； 培养特性： 培养特性营养要求不高，普通培养基 即可生长，中等大小S型菌落，并因种不同 出现金黄色、白色、柠檬色脂溶性色素，金 萄菌溶血毒素在血平板上形成β溶血。 金黄色葡萄球菌（G+）生物学性状 菌体细长且长短不一 ，有时呈球杆状 或线状，成对或短链状排列。菌体的一 端有单鞭毛，在暗视野显微镜或相差显 微镜下观察可见细菌运动活泼。 具有乙酰胺酶的细菌能利用乙酰胺作 为碳源，并分解乙酰胺产碱，酚红为 pH指示剂。（酚红pH指示范围6.6— 8.0之间显示橙色，pH低于6.6呈 现黄色，pH高于8.4呈现红色） 铜绿假单胞菌（G-）生物学性状 菌落特征: 典型菌落：扁平湿润，边缘不规则，菌落和培养基灰绿色，表面有金属光泽。 大肠型菌落：菌落圆形凸起，似大肠杆菌 黏液型菌落：菌落凸起，呈粘液状 侏儒型菌落：细小，无光泽 粗糙型菌落：菌落中央凸起、边缘扁平、表面粗糙 大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属 光泽。 当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。 大肠杆菌生物学性状 大肠杆菌是革兰氏阴性菌，染色后 为红色，细菌形态为短小的杆状， 单个存在。 芽孢杆菌（G+）生物学性状 1、芽孢 某些菌生长到一定阶段，细胞内形成一个圆形、椭圆形或卵圆形的内生孢子，是对不良环境有较强抵抗力的休眠体。芽孢形成的位置可分为近中央，末端，中央。 具有很强的抗热、抗干燥、抗辐射、抗化学药物能力。含水量低、壁厚而致密，通透性差,不易着色。新陈代谢几乎停止，处于休眠状态。一个芽孢萌发产生一个个体。 芽孢的抗热机制，目前尚不清楚，但可能与含水量低、壁厚而致密、芽孢中的酶分子量小有关，比较耐热。 芽孢的特性: 黑曲霉生物学性状 菌丛呈黑褐色，顶囊大球形，小梗双层， 分生孢子为球形，呈黑、黑褐色，平滑或粗糙。 对紫外线以及臭氧的耐性强。菌丝发达，多分 枝，有多核的多细胞真菌。 黑曲霉的菌丝、孢子经常呈现各种颜色， 如:黑、棕、绿、黄、橙、褐等，菌种不同， 颜色也不同。 白色念珠菌（G+）生物学性状 本菌细胞呈卵圆形，很象酵母菌，比葡萄球 菌大5～6倍，革兰氏染色阳性，但着色不均 匀。 在病灶材料中常见菌细胞出芽生成假菌丝， 假菌丝长短不一，并不分枝，假菌丝收缩断 裂又成为芽生的菌细。念珠菌对热的抵抗力 不强，加热至60℃1小时后即可死亡。但对 干燥、日光、紫外线及化学制剂等抵抗力 较强。 微生物检测基本操作流程 化验室的清洁 (1)在化验室操作时，必须穿工作服和佩戴口罩及橡胶手套，无菌操作意识应严格要求，操作应在固定场所进行。 (2)所有的培养物，被污染的玻璃器皿及阳性的检验标本，应放入消毒水中浸泡消毒，再用高压蒸气灭菌或用水煮沸后再清洗。 (3)工作完毕，双手应用肥皂和水洗净。 微生物检测基本操作流程 无菌室的要求 (1)无菌室应分为无菌操作间和缓冲间，缓冲间要比无菌操作间大一些。 (2)无菌室的高度应在2.2—2.5 米为好。 (3)缓冲间、无菌操作间的门，不能互相对着，应错开，而且是侧拉门。 (4)缓冲间、无菌间以及操作台内各安装30 瓦的紫外灯一支，每10—15平方米安装30 瓦的紫外灯管1 支为宜。紫外灯安装在离操作台面1.0—1.5米高度处为宜。 (5)无菌室的室温应控制