牛肉膏蛋白胨培养基的配制与灭菌.pptVIP

斜面培养基接种法 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管内，从斜面上轻轻挑取少量菌苔退出菌种管。再伸进待接种的培养基管，进行斜面培养基接种，从斜面底部轻轻向顶端弯曲划线，不要触破培养基表面。 * 斜面培养基接种法 * 请大家划线接种大肠杆菌、金黄色葡萄球菌，置于培养箱16~18h后取出置于4℃冰箱保存 * 在《微生物培养与检验》课程基础上，来进行抗菌药微生物水平的实验。包括抑菌试验和杀菌试验。 实验室的仪器都有相应的标准操作规程，大家在使用之前要认真学习正确规范的操作，避免出现不必要的损伤。不会操作的，要及时请教同学或老师;我们在课堂上也会讲解仪器的使用规范，希望大家在使用之前要认真学习 2.试管与棉塞 * 3.接种环，涂布棒 * 4.高温高压蒸汽灭菌锅 * p42 高压蒸汽灭菌 请回顾灭菌锅的操作方法 * 1）用之前检查水位及水质。若水质不好，需换水 2）放置灭菌物品，勿过满；瓶子灭菌，瓶盖拧松 3）盖上锅盖，相对的两个螺帽一起拧 4）启动加热，同时打开放气阀；检查安全阀是否关上。调整温度时间121℃ 15min。 5）待排气阀冒出大量热气并持续约2~5min后排尽冷空气后，再将其关闭； 6）灭菌结束，待压力下降至0，可打开放气阀，之后开盖。注意防止烫伤 7）固体物品可进行干燥；液体物品冷却后拧紧。尽量避免二次污染。 * 5.鼓风干燥箱 * 6.超净工作台 * 每次使用前，先用75%酒精（或新洁尔灭）擦洗台面，并提前用紫外线灭菌灯照射15~30min处理净化工作区内积存的微生物；关闭灭菌灯后应启动风机使之运转2min后再进行培养操作；工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流流型不受干扰；使用完毕应及时清理工作台面上的物品并用酒精擦拭台面使之始终保持洁净。 * 7.微量移液器的使用 * 今天的工作： 1.固体物品的灭菌 2.配制培养基并进行灭菌 3.学习倒平板 4.学习斜面培养基制作 5.超净台的准备 6.划线接种 7.灭菌效果检查 * 开始实验 1.固体物品： 1）平皿（6只/组） 2）试管与棉塞/塑料封口（6只/组）的包扎 3）灭菌蓝色、黄色和白色枪头 将以上物品放入灭菌锅中进行灭菌121℃ 20min * 2.培养基： 培养基分 液体、半固体和固体 3种 液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于细菌扩大培养； 半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存细菌 固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分离细菌 * （1）固体培养基配置 牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g pH 7.4-7.6，加水至1 000mL；若需分装，需先融化，摇匀后分 于121℃高压灭菌15~20min备用 用途：普通细菌常用的培养基 * 请大家配制： 请大家查看“营养琼脂”的成分与配制说明，每组配置牛肉膏蛋白胨固体培养基150mL于锥形瓶中 请大家先写出1L的配方，然后再写出150mL的配方 * 配制完毕，将配制好的培养基装入锥形瓶内，瓶口塞上棉塞，用牛皮纸/报纸包扎瓶口，标注好组别，进行高温高压蒸汽灭菌 * （2）液体培养基 为固体培养基中不含琼脂 牛肉膏蛋白胨培养液 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g pH 7.4-7.6，加水至1 000mL 于121℃高压灭菌15~20min备用 用途：普通细菌常用的培养基 * 请大家查询LB培养基配方 每组配置LB液体培养基50mL于锥形瓶中，包扎好瓶口（纱布+牛皮纸/报纸）后灭菌 请大家先写出1L的配方，然后再写出50mL的配方 * 1.固体物品的灭菌 √ 2.配制培养基并进行灭菌 √ 3.学习斜面培养基制作 4.学习倒平板 5.超净台的准备 6.划线接种 7.灭菌效果检查 * 3.如何倒平板 （1）超净工作台的准备 将超净工作台台面用酒精棉球擦干净；关上门后，紫外灯打开，灭菌15-30min 灭菌结束，打开风机 * 2.加热融化培养基（若为刚灭菌结束未凝固的培养基，则略） 将培养基放入微波炉内加热融化，注意观察，不要加热时间过长或温度过高，以免液体溅出。 * 4.倒平板 超净工作台灭菌完毕，关紫外灯，打开风机； 超净工作台门不能开太高，约20cm即可； 用新洁尔灭棉球擦拭工作台和手； 将酒精灯瓶外擦干净，转移入工作台； 将已融化的培养基瓶身擦干净，转移入工作台； 待培养基冷却至50°C左右（不烫手为原则，但是不可冷却过度），倒平板。 * 平板要求：平板平整，无凸起；平板无“挂壁”；培养基布满整个平皿