微生物的遗传变异和育种.PPT

第六章微生物的遗传变异和育种 第二节 基因突变和微生物育种 三、诱变育种 （1）挑选优良的出发菌株 ①选用经过生产实践中选育出来的自发突变菌株进行诱变处理效果较好； ②选用本身能少量积累所需产品或其前体的菌株； ③选用已发生过其他突变，如代谢产物变化的菌株。例如在选育金霉素高产菌株时，发现用丧失黄色素合成能力的菌株作出发菌株比分泌黄色素者更有利于产量变异； ④选用对诱变剂敏感性较高的增变变异株，对诱变剂的敏感性显著高于原始菌株； ⑤选用经几次诱变处理能提高产量或效价的菌株等等。 2、诱变育种中的几个原则 第六章微生物的遗传变异和育种 第二节 基因突变和微生物育种 三、诱变育种 (2)单孢子(或单细胞)悬浮液的制备 用生理状态一致的单细胞或单孢子悬浮液，使细胞均匀接触诱变剂，减少分离性表型延迟现象的发生，并防止长出不纯菌落。 表型延迟:诱变剂通常仅作用于某一单链的某一序列。因此，突变后的性状无法反映当代的表型，而要通过DNA的复制和细胞分裂后才表现出来，于是出现了不纯菌落。这种遗传型虽已突变，但表型却要经DNA复制、分离和细胞分裂后才表现出来的现象。 悬浮液可以用生理盐水(物理诱变)或缓冲液(化学诱变)制备，以减少pH值的变化造成的影响。为了确定悬浮液的浓度，一般真菌孢子或酵母菌细胞的浓度大约为106个/ml左右为宜。放线菌孢子或细菌不超过108个/ml。 2、诱变育种中的几个原则 第六章微生物的遗传变异和育种 第二节 基因突变和微生物育种 三、诱变育种 2、诱变育种中的几个原则 (3)选择简便有效的诱变剂 (1)物理诱变剂 包括非电离辐射的紫外线、激光和离子束等，能够引起 电离辐射的X射线、γ射线和快中子等。 紫外线(UV)操作最简便，波长在250～270nm处诱变效果 最好，在260nm左右的紫外线被核酸强烈吸收，引起DNA 结构变化。其作用机制： ①DNA链或氢键的断裂②DNA分子内或分子间的交联。③ 核酸与蛋白质的交联；④胞嘧啶的水合物作用；⑤形成 胸腺嘧啶二聚体： 光复活作用 暗修复作用 第六章微生物的遗传变异和育种 第二节 基因突变和微生物育种 三、诱变育种 2、诱变育种中的几个原则 ②化学诱变剂 常用的有甲基磺酸乙酯(EMS)、硫酸二乙酯(DES)、氮芥、亚硝基胍、甲基亚硝基脲(NMU)等。后两种因有显著的诱变效应，故称之为“超诱变剂”。 ③艾姆氏试验 由于生物的遗传物质都是核酸，故凡能使核酸结构发生改 变的因素都可影响生物学功能。 艾姆氏试验(Ames test)是一种利用细菌营养缺陷型的回复 突变来检测环境或食品中是否存在化学致癌剂的简便有效 方法。 (3)选择简便有效的诱变剂 Ames试验 第六章微生物的遗传变异和育种 第二节 基因突变和微生物育种 三、诱变育种 2、诱变育种中的几个原则 艾姆氏试验测定潜在化学致癌物的方法如下： ①将不同浓度的试验药品与在肝脏中与酶接触，经代谢变化 后才有诱变作用。 ②将上述混合物适当保温，以圆滤纸片吸取不同浓度的试样 制成试验滤纸片。 ③以基本培养基倒成平板，将鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸缺陷 型突变株涂布于平板上，再将不同浓度的滤纸放入平板中 央，同时做一空白对照。 ④在基本培养基上滤纸片周围长出的菌落即为养缺陷型的回 复突变株，而营养缺陷型突变株在空白对照平板上滤纸片 周围未长菌落。分析计算试验药品是否具有诱变作用，以 及最有效的诱变浓度。 (3)选择简便有效的诱变剂 ③艾姆氏试验 证明Ames试验重要性的应用实例： 国外曾开发了一种降低妇女妊娠反应的药物“反应停”，由于其 药效显著，在60-70年代十分流行， 但随后人们就发现畸形儿的出生率明显增高，而且生产畸形儿的 妇女大多曾服用“反应停”，后来采用Ames试验发现这种物质的确 具有很强的致突变作用，因此这种药物被禁止使用 但如果能在这种药物上市之前就进行Ames试验检测，那么这种大 量出生畸形儿的悲剧完全可以避免。 第六章微生物的遗传变异和育种 第二节 基因突变和微生物育种 三、诱变育种 2、诱变育种中的几个原则 在育种工作中，常以杀菌率表示诱变剂的相对剂量。 杀菌率的计算：取等量被处理菌体与未被处理菌体分别在 完全培养基上培养，计数各自长出的菌落按下式计算： (4)确定最适的诱变剂量 杀菌率= 未被处理的菌落数-被处理的菌落数 未被处理的菌落数 ×100% 第六章微生物的遗传变异和育种 第二节 基因突变和微生物育种 三、诱变育种 2、诱变育种中的几个原则 （5）充分利用复合处理的协同效应 （6）利用和创造形态变异、生理变异与产量间的相关指标 （7）设计高效筛选方案 （8）创造新型筛选方法 第六