激光联合环磷酰胺对小鼠肿瘤增殖及血管新生的影响.docVIP

PAGE PAGE 1 激光联合环磷酰胺对小鼠肿瘤增殖及血管新生的影响 　　[摘要]目的探讨低能量激光联合环磷酰胺（CTX）对小鼠肿瘤增殖及血管新生的影响。方法建立荷瘤小鼠模型，随机将40只荷瘤小鼠分为生理盐水对照组（NS组）、低能量激光照射组（JG组）、环磷酰胺组（CTX组）、低能量激光联合环磷酰胺组（JG+CTX组），每组各10只。分别给予相应药物或激光治疗连续10d。观察肿瘤生长情况，测量荷瘤小鼠的瘤质量、脾质量，计算抑瘤率及脾指数；原位杂交法检测瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达，免疫组化方法检测瘤组织微血管密度（microvesseldensity，MVD）及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况。结果①NS组小鼠给药第7、10天体重[（23.24±0.60）、（26.79±0.59）g]低于JG组[（26.74±1.23）、（26.79±0.59）g]、CTX组[（25.55±0.71）、（25.69±0.35）g]、JG+CTX组[（26.09±0.68）、（26.41±0.67）g]，差异均有高度统计学意义（均P0.01）；JG组、CTX组和JG+CTX组抑瘤率分别为（50.82±0.33）%、（65.57±0.24）%、（53.69±0.33）%；JG组、JG+CTX组的瘤质量[（1.20±0.43）、（1.13±0.43）g]低于NS组[（2.44±0.23）g]，JG组、JG+CTX组的脾指数[（14.30±0.20）、（14.51±0.16）‰]高于NS组[（9.96±0.18）‰]，差异均有统计学意义（P0.05或P0.01）。②JG组、CTX组、JG+CTX组VEGFmRNA平均灰度[（62.28±2.36）、（68.12±2.60）、（69.95±4.38）]低于NS组（49.87±3.76），差异有高度统计学意义（P0.01）；JG组VEGFmRNA平均灰度低于与JG+CTX组，差异有高度统计学意义（P0.01）；JG+CTX组VEGFmRNA平均灰度与CTX组比较，差异无统计学意义（P=0.234）。NS组MVD值（14.57±0.58）高于JG组（13.52±0.33）、CTX组（12.30±0.29）、JG+CTX组（11.49±0.44），差异有高度统计学意义（P0.01）；JG+CTX组MVD值低于JG组、CTX组，差异有高度统计学意义（P0.01）。③NS组PCNA阳性细胞数[（80.6±2.01）个]高于JG组[（73.8±2.57）个]、CTX组[（63.7±2.75）个]、JG+CTX组[（66.1±3.38）个]，差异有高度统计学意义（P0.01）；CTX组与JG+CTX组PCNA阳性细胞数差异无统计学意义（P0.05）。结论低能量激光对小鼠移植瘤具有一定的生长抑制作用，联合环磷酰胺可明显抑制肿瘤细胞的增殖及血管生成，具有协同抗肿瘤作用。 　　[关键词]肝癌；低能量激光；环磷酰胺；血管新生；增殖细胞核抗原 　　[中图分类号]R730.57[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2013）05（c）-0034-04 　　复发和转移一直是困扰临床医生的重大问题。放疗和化疗出现的严重毒副作用，使得治疗效果不尽人意。血管生成在肿瘤增殖中起着重要作用，而生物学治疗给人类带来了新的希望，目前用激光生物学疗法治疗疾病已成为国内外学者研究的热点。本研究通过分析低能量激光照射与环磷酰胺（CTX）联合应用对肿瘤细胞增殖及血管生成的影响，探讨可能的抑瘤机制，以期对肿瘤治疗开拓新的研究方向。 　　1材料与方法 　　1.1实验试剂及设备 　　CTX由江苏恒瑞医药股份有限公司提供，批血管内皮生长因子（VEGF）mRNA原位杂交试剂盒购自武汉博士德生物制品公司；增殖细胞核抗原（PCNA）单克隆抗体、免疫组化SP检测试剂盒购自福建迈新生物技术开发有限公司；肝癌细胞H-22株由北京大学肿瘤研究所引进；JD-Ⅲ型激光治疗机为南京医用激光仪器厂生产。 　　1.2实验动物 　　KM小鼠43只（其中3只进行种植瘤培养），购自内蒙古大学动物实验中心，许可证号：SCXK（蒙）2009-0001，体重18～22g，雌雄各半。 　　1.3实验方法 　　1.3.1模型建立3只KM小鼠腹腔注射0.5mL肝癌细胞H-22株进行培养，1周后取腹水生长良好的小鼠无菌条件下取腹水10mL，置冰盒内，用生理盐水按1∶2稀释成细胞悬液，调节细胞浓度为2.5×107细胞/mL，按0.2mL/只接种于小鼠右腋部皮下，制成荷瘤小鼠模型。 　　1.3.2动物分组40只KM小鼠接种肿瘤细胞4h后，随机分为4组，每组各10只。①生理盐水（NS）组：NS20mL/（kg?d）灌胃。②低能量激光照射组（JG组）