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单克隆抗体 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖(克隆),形成基因型相同的细胞群,这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点: 特异性强、灵敏度高、能大量制备、 如何大量生产单克隆抗体? 利用B淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选,继续培养 能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 1 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法,设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案 2、该方案能达到预期效果吗?为什么? 4、图中B为________过程,常用_________作为诱导剂,该细胞继承___________的遗传特性,既能__________,又能___________。 1、该实验方案的目的是__________ 3、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______ 5、C过程指细胞培养,该过程包括_____培养和_____培养两个阶段。 制备单克隆抗体 B细胞 抗体 细胞融合 灭活病毒 双亲细胞 分泌特异性抗体 无限增殖 原代 传代 50 B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔 A C 四、目的基因的检测与鉴定 检测 ①导入检测:目的基因是否导入受体细胞DNA DNA—— DNA分子杂交 ②表达检测 转录检测——分子杂交 翻译检测——抗原抗体杂交 分子检测法 鉴定 抗虫鉴定 抗病鉴定 活性鉴定等 个体水平的鉴定 小 结 基因工程的基本内容 基因操作 的基本步骤 基因操作 的工具 限制性内切酶 DNA连接酶 运载体 目的基因与运载体结合 目的基因的检测和表达 将目的基因导入受体细胞 目的基因的提取 基因工程药品的生产 基因诊断 返 回 基因治疗 (一)基因工程与医药卫生 蛋白质工程 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造,或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活的需求。 蛋白质工程流程图 从预期的蛋白质功能出发 设计预期的蛋白质结构 推测应用的氨基酸序列 找到相应的脱氧核苷酸序列 比较:基因工程和蛋白质工程 基因工程 蛋白质工程 相同点 都要改造基因,都属于分子水平 产生新的 基因型,无新基因 基因(型) 产生的蛋白质 原有的 新的 联系 蛋白质工程以基因工程为基础, 是基因工程的应用和延伸 32.用转基因技术培育出了抗TMV的烟草,主要流程如图-21所示。 (1)经过程②获得的目的基因两侧除应含有相关 的酶切位点外,目的基因的两端还必须有 。 (2)由图分析,构建的重组质粒上含有的标记基因是 基因。 (3)过程⑤采用的是植物组织培养技术,培养基中除含有卡那霉素及植物必需的各种营养成分外,还必须添加 ,以保证受体细胞能培养再生成植株。 限制酶 启运子和终止子 卡那霉素抗性 植物激素 21.(6分,每空1分)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点,图甲、图乙中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题: (1)一个图甲所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后,分别含有 、 个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造,插入的SmaⅠ酶切位点越多,质粒的热稳定性越 。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用Srna Ⅰ切割,原因是 。 (4)为了获取重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入 酶。 (5)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。 21.(6分,每空1分) (1)0、2 (2)高 (3)SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因 (4)DNA连接 (5)鉴别和筛选含有目的基因的细胞 专题2 细胞工程 细胞工程 应用的原理和方法 研究的水平 研究的目的 细胞生物学和分子生物学 细胞整体水平或细胞器水平 按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品 概念 分类 植物细胞工程 动物细胞工程 植物细胞工程的理论基础是: 植物细胞的全能性 植物细胞工
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