第三章动物细胞培用液.pptVIP

动物细胞进行体外培养离不开其在体外生存、生长的各种溶液，此即培养用液。包括：培养液、缓冲液、平衡盐溶液、血清以及消化液、PH调整液和抗生素液等其它常用液。 一、蒸馏水的制备/培养用水 水是细胞体外生存最基本的环境条件。体外培养的细胞对水质特别敏感，对水的纯度要求较高，细胞培养用水的质量要求为电阻率在1×106 ??cm以上，双蒸馏水的水质刚刚达到这一标准。 金属蒸馏器制备的蒸馏水，一般不作为培养用水。 去离子水不建议使用。 存放：棕色磨口试剂瓶。 现多购买使用。 二、缓冲溶液 缓冲液：由缓冲剂配制成的溶液在加入一定量的酸或碱时其氢离子浓度改变甚微或几乎不变，此种溶液称为缓冲液。 组成： 弱酸与弱酸强碱盐 弱碱与弱碱强酸盐 例：H2CO3/NaHCO3 Na2HPO3/NaH2PO3 理想缓冲液应有以下几个特点： ①能持续维持培养液的PH值恒定。 ②不干扰在培养液中进行的化学或生物化学反应。 ③不影响实验和观察。 三、生理盐水 最简单的生理盐水是，0.9%NaCl溶液，等渗。后期发展成为了现在的各种平衡溶液。 四、平衡盐溶液（BSS）及其配制 又叫盐溶液，集缓冲能力，生理盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体。 主要成分：无机盐和G，另外含有少量酚红，酸碱度变化的指示剂。 注意事项： ①Ca2+、Mg2+物质要单独溶解。 ②所选用的试剂尽量用GR试剂或AR试剂。 ③配制消化液时先用无Ca2+、Mg2+的D-Hanks液或是PBS液。 ④加入酚红的量不得超过0.02g/1000ml。 ⑤配好后要分装，4℃保存，可配10×贮液，使用时过滤（滤器），不含G的可高压过滤。 标准及纯度， 一般化学试剂的品级：一级试剂、 二级试剂 、三级试剂、 四级试剂 国内标准名称：优级纯（保证试剂）、分析纯、化学纯、实验试剂 国内简写代号：GR AR CP LR 国内标签颜色：绿色 红色 蓝色 中黄色 五、天然培养基 包括各种动物血清、水解乳蛋白、胶原和组织提取液。 1血清 组织细胞培养中最常用的天然培养基是血清,因为血清中含有丰富的营养物质,包括大分子的蛋白质和核酸等,对促进细胞生长繁殖、粘附及中和某些毒性物质的毒性起着一定的作用。血清的好坏也常常是实验成败的关键。 胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、人AB血清、兔血清等，其中以胎牛血清最好，但较贵。 ①能提供细胞生存生长和增生所必需的生长调节因子。 ②能补充基础培养液中没有或量不足的营养成分。 ③含有一些可供贴壁依赖型细胞在培养皿表面贴附和铺展的生长基质成分。 ④提供载体蛋白，可结合维生素、脂质、金属离子等。 ⑤在有些情况下，血清有中和毒性物质保护细胞不受伤害的作用。 ⑥给培养液提供良好的缓冲系统。 ⑦提供蛋白酶抑制剂，保护细胞免受死细胞释放的蛋白酶的损害。 血清的不足之处： ①存在不少有害于细胞生长和繁殖。例：补体、免疫球蛋白和一些生长抑制因子等。 ②血清的成分不明确，影响对结果的分析。 ③不同动物，不同批次血清成分和活性差别比较大，使的培养结果不稳定。 血清一般不自制，如果特殊需要需自制时要注意： ①消毒 ②空腹 ③隔绝 ④倾斜、室温、4℃过夜 ⑤离心 ⑥滤过，血清检测 2水解乳蛋白 为乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解的产物，含有丰富的氨基酸，是常用的天然培养基，可用于许多细胞系和原代细胞培养。 淡黄色粉沫，易结块，溶液呈酸性。 配制：0.5g,Hanks,BSS,定容100ml,置室温下1-2h,高压灭菌,4℃,贮存。 使用：0.5%水解乳蛋白,37℃水浴预温后,无菌下与合成培养液1:1混合使用,即可培养。 3鼠尾胶原 能促进组织和细胞的附着,改善细胞生长表面特性胶原来源有尾腱,真皮和牛眼的水晶体，实验室常用大鼠尾胶原。 使用方法： ①均匀涂于器皿的细胞生长面，不留液滴。 ②用氨水棉封口放于灭菌饭盒中 ③室温2h，氨气与鼠尾胶原作用，胶原凝固 ④BSS洗涤胶原面后，经细胞培养液浸泡过夜，37℃备用。 六、合成培养基 1 合成培养基的基本成分 合成培养基的基本成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 （1）氨基酸 一般多为左旋（L-），有必须氨基酸，非必须氨基酸中的的谷氨酰胺，另外特殊需要加入其它氨基酸。是合成培养基的主要内容。 （2）碳水化合物 糖类为主，既是能量来源，也是合