image j对SDS-PAGE灰度分析定量蛋白浓度.ppt

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Image j对SDS灰度分析定量蛋白浓度;每个泳道对应的数值为点样体积( μl ),制备所有样品的时候蛋白溶液和2*loading buffer的体积比均为1:1;1、打开image j 把SDS图片拖到红色箭头所指区域。;2、单击image—Type—8-bit转换成灰度图像。;3、单击process—subtract background会出现左图的界面,勾选light background和preview,选择合适的像素值,在此一30.0pixels为例,单击OK。;4、方框工具选择并画出第一条永道,单击analyze—gels—select first lane也可以用快捷键(Ctrl+1);4、方框工具选择并画出第一条永道。单击analyze—gels—select first lane也可以用快捷键(Ctrl+1),会出现左图界面,点击OK,并在图上画出第一条条带。;5、单击analyze—set measurements出现 下图界面,勾选Area和mean gray value单击OK。;7、选好条带以后按住Ctrl+m出现一个文本,如上图所示;然后把鼠标移到黄色方框的中心,按住鼠标,把方框??到下一个条带,然后按Ctrl+m,文本中出现第二条带的面积和平均灰度值;以此类推。;8、新建一个Excel,把文本框内的数据复制到表格,计算绝对灰度=255-灰度平均值,同时标出点样体积。理论上,标样的绝对灰度值的比值和点样体积比值是相等的,我们可以选择绝对灰度比值和体积比最接近的一对数据,如红色框内数据。;

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