细胞凋亡及其检测方法.pptVIP

* * * * 这两种方法用于检测组织或培养细胞的凋亡细胞的核断裂片段，可以检测早期的细胞凋亡，且特异性和敏感性都是较高的，就其敏感性而言，TUNE鉴定高于INST鉴定。值得注意的是，就ISEL技术本身而言，是不能区别凋亡、坏死和自溶性死亡，必须结合凋亡细胞的形态学特征加以判断。TUNEL和ISNT鉴定标记的阳性细胞可结合下列标准加以判断：显示单个或少数几个细胞孤立地分布在组织中；具有凋亡细胞的核特征，即核固缩，表现为一个或多个染色体团块，或者凋亡小体核片段；周围或局部无炎症反应的征象。 * * 根据标记在dUTP上的标记物和显示系统的不同，可分别作组织切片凋亡细胞的原位检测、培养细胞涂片和培养细胞的流式细胞仪检测、培养细胞涂片和培养细胞的流式细胞仪检测。 * * * * DNA断链可是单股断链也可是双股断链，两种断链都有游离的3’-羟基末端，因此，TUNEL鉴定可以检测凋亡细胞核中的单股和双股DNA断链。用于组织切片和凋亡培养的检测，其敏感性较ISNT要高。 * * * 时间要得当消化时间太长，非特异性染色增多，使一些非凋亡细胞着染，同时将破坏细胞形态，细胞复染时着色浅，背景也不清晰。而消化时间太短，细胞膜达不到应有的通透性，影响标记效果。 * 主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态