DNA的半保留复制(semiconservative).ppt

Chapter 3DNA replication;;问题： 1、双螺旋如何打开？ 2、打开所需的能量从何而来？;5’;2、半保留模型的证实：Meselson-Stahl实验（1958年）;;3、半保留复制机制 复制时DNA双螺旋的两条链解开，并分别作为模板指导互补链的合成。每个子代DNA的一条链来自亲代的DNA，另一条链则是新合成的 。;问题： 1、复制可以随机起始吗？ 2、复制是单向的还是双向的？ ;二、复制的起点、终点和方向;复制起点（origin）;问题： 1、新生链合成的方向是从5’to 3 ’ 还是3 ’to 5’，还是两个方向均可？ 2、复制时两条链是完全解开吗？ 3、两条链是同时进行复制的吗？;三、半不连续复制模型 1968年 Okazaki(冈畸) ;;3′;四、RNA引物（RNA primer） ;问题：为什么需要有RNA引物来引发DNA复制呢? （1）RNA引物可以提供3’-OH末端作合成新DNA链起点； （2）提高了DNA复制的准确性。因为DNA复制开始时掺入的核苷酸往往容易出错，加在RNA引物中可以被切除，不会影响DNA复制的准确性。 ;五、参与DNA复制的蛋白质;3. 引发酶（primase） Dna G (E. coli ) 引发体 Primosome 4. DNA连接酶（DNA ligase） 需要能量 NAD（E. coli ）/ ATP（真核） 5. DNA螺旋酶（DNA gyrase）---- 拓扑异构酶Ⅱ 断裂双链 引入负超螺旋 （swivel function) 需要ATP;6. DNA聚合酶（DNA polymerase, Pol） Three DNA Polymerases （E. coli）;讨论： 1、Pol I and III功能上有哪些相同点？ 2、 Pol I and Pol III功能上有哪些不同？ ;（4）Pol I and Pol III相同的功能特点： [1] 以脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)为底物催化合成DNA [2] 需要模板(3′ 5′)和引物的存在 [3] 不能从头合成新的DNA链（必须有3 ’ -OH末端） [4] 催化dNTP加到生长中的DNA链的3’-OH末端 [5] 催化DNA合成的方向是5 ’ →3’ [6] 有 3 ′ 5 ′核酸外切酶活性（校对功能）;（5）Pol I and Pol III不同的功能特点： [1] 5 ’ →3’核酸外切酶活性不同。 [2] Pol I 可进行缺刻平移、去除引物。 [3] 二者聚合酶活性不同，Pol III是大肠杆菌 DNA复制中链延长反应的主导聚合酶。 [4] Pol I 主要功能是进行DNA 损伤修复。 ;Composition of E. coli DNA Polymerase III Holoenzyme;;2、DNA聚合酶III----形成不对称的二聚体 使前导链、滞后链的合成可同时进行;后滞链模板形成了一个回环，使环中RNA引物和冈崎片段的合成方向与前导链一致，以适应双链在同一复制体上进行复制;“θ”型复制 环状DNA的复制方式，即从复制起点开始，双向同时进行，形成θ样中间物 环节： DNA复制的起始 DNA链的延伸 DNA复制的终止 ;一、细菌DNA复制起始 （一）复制起始复合体 DnaA（起始点结合蛋白) DnaB（解旋酶） SSB DnaC（装载解旋酶和引发酶） HU（识别并刺激OriC 形成开链） Gyrase（促旋酶）---拓扑异构酶Ⅱ;（二）复制起始区的结构特点 1、富含AT 2、3个13bp的重复序列---解链的位点 3、4个9bp的重复序列----- DnaA结合位点;（三）复制起始引发的过程： 1、DNA复制起点双链解开 ，形成复制叉;;2、RNA引物的合成 leading strand: primase（引发酶） lagging stran