酶学技术应用.pptVIP

酶的分析检测技术 酶促反应分析 酶活力测定方法 常见酶类的活力测定方法 ? 維持酵素活性緩衝液 緩衝液可維持溶液的恆定酸鹼度及離子濃度，兩者都會影響酵素的活性 經常在緩衝液中加入一些物質，以增加酵素安定或保持活性 溫度的影響 濃度的影響 試劑的保存 避免潮解 分裝凍藏: 切勿反復 凍結-解凍。? 甘油凍藏 避光防菌 酵素失活的原因 可歸類成如下的物理性或化學性原因。 (1) 蛋白質 變性： (2) 酵素 活性區 破壞： (3) 蛋白脢 水解： (4) 酵素 抑制劑： 酶反应速度曲线 酶反应速度和底物浓度的关系 米氏方程 v=Vmax[S]/(Km+[S]) Km为酶反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度，为酶的特征常数。 同一酶对不同底物Km不同。 Km最小的底物为该酶的最适底物。 酶活力的测定 酶活力的测定就会是测定酶促反应速度。 必须测定酶反应的初速度。 底物浓度必须足够的大，至少为Km的10倍。 酶浓度必须适合。 1、化学法 化学法是利用化学反应使产物变成一个可用某种物理方法测定的化合物。如根据比色、酸碱滴定、量热、量气法等来计算酶的活性。 2、放射性化学法 经同位素标纪的底物在酶活力测定中有很重要的价值，用于标记的同位素一般有： 当同位素衰变时放出β射线（粒子）。 放射性化学法原理与化学法相似，但反应终止后，必须把放射标记的底物与产物分离