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原生质体融合技术选育易提取的谷氨酸高产菌 蚀.无氧化. 热导器的外部在无人为损坏的情况下, 一 次加料可连续使用12～i4年左右据设计 推测,每平方米的取暖费用,在l2年的总和 不足三分钱.热导器的输热管也可连在暖器 片上它具有节能,性能稳定可靠,制造工 艺简便,结构简单,安全性好等优点,如果 人为的造成漏气时对人体无任何影响.加新 料后可继续使用据检测计算,节约能源可 在75～8O%左右. 该产品结构简单,投资2万元足够.厂唐 占丝1匾覆z0皿(包括化验室),生产人员 包括梗导在内2O人,生产设备,化验器县所 需费用很少. 热导的i可世和推广将会显示出它的优越 性,为余热回收节约能源开辟新曲途径 (薄宏供稿) 原生质体融合技术选育易 提取的谷氨酸高产菌 天津轻工业学院利用原生质体融台技 术,在不对亲株做任何诱变的前提下,成功 地使天津短杆菌TG一出明与钝齿棒杆菌B9的 原生质体进行融合,获得兼有两亲株遗传性 状一一细胞个体大,产酸高的融合子F263及 F288. 1.通过梯度培养皿方法发现.天津短杆 菌(Brevlbacteri~umTianjin)TG-S6d遗 传标记为s:钝齿棒杆菌(Corynebacceri. umcrenatum)B9遗传标记为L: 2.对TG一8∞和B9菌进行了扫描电子显 微甓观察,发现亲株天津短杆菌TG一866细 胞为短的直杆菌,无分枝,0.8～0. 7×1. 2 ～ I.5m,两端钝圆通过穿刺培养,发现其 无运动能力.革兰氏染色量阳性 钝齿榨杆菌B9纽胞为微夸的杆菌,两端 钝圆,呈一端膨大的棒状,无分枝,0.6— 0.76X1.67～2.0m.穿刺培埠无运动能力. 革兰氏反应呈阳胜 3.通过亲株产腔的测定,亲株TG一866 产酸很高,达8.52g/d[,转化率为53.2嘧, 而另一亲株B9则产酸较低.仅5.5]g/dl,转 化率为34.4嘶.另外,TG一8粕的发酵温度 要比B9的发酵温度高,前者为34～40℃.后 舞为30～0℃ 4.天津短杆潜TG一≈B6及钝齿棒杆菌B9 均对蛋清溶菌酶不敏感.破壁前必须用青霉 素进行预处理才能提高蛋清溶菌酶的敏感 性TG一866以采用o.4ml青霉素处理2小 时为宜,B9吼采用0.9~/mI青霉素处理1.5～ 2小时为宜 5.天津短杆菌TG一86螈生质体制备的 虽佳条件为:Img,/ml的溶菌酶在34℃酶解 】7个小时.在该条件下,原生质体形成率达 99 . 9铀,原生质体再生率达23%. 6.钝齿棒杆菌B9原生质体制备的最佳条 件为:0.8mg/ml的溶菌酶在3b℃酶解15小 时.在该条件下,愿生质体形成率达99.9嘶 原生质体再生率达28%. 7.天滓短杆菌TG-868与钝齿棒杆菌B9 原生质体融合的最佳条件为:s5qo的PEG当 Ca:+离子浓度为5oreMud,在36℃融合SO分 钟,融台时的pH为10.5在该条件下,原生 质体融台频率可达3.2X10一. 8.通过上述实验,共筛选出310株细胞个 体大的融合子,经对这3l0株融台子进行初 筛,共选出两株产酸高的融合子,即F26及 F2妇.其初筛产酸分别为2.75g/dt,2.63g/ dI 9F263~F288菌株的高产各氨酸摇瓶 条件为:一级种子种龄为1o小时,发酵培养 基初糖为16%.玉米浆0.8嘶(F263)或 o.T%(F288),初尿0.8%,采用少量多次 流加屎索控制phi7.o～7.2.发酵始温为 7 34℃,发酵终了温嚏为40℃,跚F263及F288 可以耐高温. 10.在最佳摇瓶发酵条件下融合予F 263谷氨酸产率为8.4~/d[转陀率为52% 融合子F288谷氨酸产率为8.0sg/di.转化率 为50.2面,由于F2日受F288的细胞个体均与 B9菌相同.并且产酸较高,所以是二株优秀 的谷氨酸生产菌. If.经过连续摇瓶传代10次,耐其谷氨 酸产率,发现第1o干的各氨酸产率与第1代 相同,固此融合子F263及F288的遗传足 稳定的,完全可以应用到T.~lk生产中去. 可以看出该顶研究对昧精生产具有重 要的现实意义仅以产酸与现行生产菌相同 来看因提取!改率可1LT613菌提高!～3野. 所以经济效益十分明显 该实验的结果很象一个亲株的DNA转移 到另一株中去的转化作用怕结果,由于在整 个实验过程中加入了DNA酶,从而排除了转 化的可能性 他们通过上进一系列实验步骤,成功地 获得了细胞个体大,谷氨酸产率高的茁株, 融台子F263及F288戒功地表现了两株的优 良特性说碣利用原生质体融合技术来选育 高产谷氨酸生产菌是完全可行的该技术存 一 般实验室条件下均可以进行并且操作简 单见效侠特别在对于与产菌有关的基目 及其他性状(如细胞个体大)的控制田子不 甚丁解的情况下,原生质体融合技术