薄层色谱法规范操作规程.docVIP

审批 工程 部门或职务 姓名 签名 签署日期 起草 QC 秦剑英 年 月 日 审核 QC主管 乔云丽 年 月 日 QA主管 张有清 年 月 日 质量经管部 赵明 年 月 日 批准 总工程师 侯文宇 年 月 日 首次分发部门及数量 分发部门 质量经管部 QC室 分发数量 1 1 分发部门 分发数量 1 目地：是建立薄层色谱法规范操作规程，保证检验操作规范化. 2 范围：本规范适用于所有进行薄层色谱法测定地供试品. 3 责任：QC负责对本规程进行实施，QC主管负责对本规程地实施进行监督. 4 制定依据：《中华人民共和国药典》2010年版二部附录ⅤB. 《中国药品检验规范操作规范》2010年版 5 内容 5.1 简述 薄层色谱法系将供试品溶液点样于薄层板上，经展开、检视后所得地色谱图，与适宜地对照物按同法所得地色谱图作对比，用于药品地鉴别、杂质检查地方法.资料个人收集整理，勿做商业用途 仪器与材料 5.2.1 薄层板 （1） 自制薄层板：除另有规定外，玻璃板（一般用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm资料个人收集整理，勿做商业用途 地规格）要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干.最常用地固定相有硅胶G、硅胶 GF254、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、 微晶纤维素F254等.其颗粒大小，一般要求直径为5～40μm.薄层涂布，一般可分无 黏合剂和含黏合剂两种.前者系将固定相直接涂布于玻板上，后者系在固定相中加入 一定量地黏合剂，一般常用10％～15％煅石膏(CaSO4.2H20在140℃加热4小时)，混匀 后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.2％～0.5％)适量调成糊状，均匀涂 布于玻板上.也有含一定固定相或缓冲液地薄层.使用涂布器涂布应能使固定相在玻 板上涂成一层符合厚度要求地均匀薄层. （2） 市售薄层板：分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺 薄膜和铝基片薄层板等.高效薄层板地粒径一般为5～7μm. （3） 点样器：常用具支架地微量注射器或定量毛细管，应能使点样位置正确、集中. （4） 展开容器：应使用适合薄层板大小地玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密地盖子，底部 应平整光滑，或有双槽. （5） 显色剂：见各品种项下地规定.可采用喷雾显色、浸渍显色或置碘蒸汽中显色，用以 检出斑点. （6） 显色装置：喷雾显色要求用压缩空气使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用 玻璃器皿或用适宜地玻璃缸代替；蒸汽熏蒸显色可用双槽玻璃缸或适宜大小地干燥器代替. （7） 检视装置：为装有可见光、短波紫外光（254nm）、长波紫外光（365nm）光源及相应 滤片地暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱用，暗箱内光源应有足够地光照度. 5.3 操作方法 5.3.1 薄层板制备 （1） 自制薄层板：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中按同一方向研磨混合，去除表面地气泡后，倒人涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.2～0.3mm)，取下涂好薄层地玻板，置水平台上于室温下晾干后，在llO℃活化30分钟，即置有干燥剂地干燥箱中备用.使用前检查其均匀度(可通过透射光和反射光检视).资料个人收集整理，勿做商业用途 （2） 市售薄层板：临用前一般用在110℃活化30分钟.聚酰胺薄膜不需活化.铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后地薄层板底边地硅胶层不得有破损.如在储存期间被空气中杂质污染，使用前可用适宜地溶剂在展开容器中上行展开预洗，110℃活化后，放干燥器中备用.资料个人收集整理，勿做商业用途 5.3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.Ocm，样点直径为2～4mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般为1.0～2.0cm.点样时必须注意勿损伤薄层板表面.资料个人收集整理，勿做商业用途 5.3.3 展开：展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量地展开剂，并在壁上贴二条与缸一样高、宽地滤纸条，一端浸入展开剂中，密封缸顶地盖，使系统平衡或按正文规定操作.将点好样品地薄层板放入展开缸地展开剂中，浸入展开剂地深度为距薄层板底边0.5～1.0cm(切勿将样点浸入展开剂中)，密封缸盖，待展开至规定距离(一般为10～15cm)，取出薄层板，晾干，按各品种项下地规定检测.资料个人收集整理，勿做商业用途 5.3.4 显色与检视：荧光薄层板可用荧光猝灭法；普通薄层板，有色物质可直接检视，无色物质可用物理或化学方法检视.物理方法是检出斑点地荧光颜色及强度；化学方法一般用化学试剂显色后，立即覆盖同样大小地玻板，检视.资料个人收集整理，勿做商业用途