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氧化铝固相萃取小柱在苦参生物碱含量测 定中应用 摘要 该文使用中性氧化铝Cleanert Alumina-N-SPE 小柱(0. 5 g/6 mL),洗脱剂为三氯甲烷-甲醇(7 : 3) 5 mL, 代替氧化铝开放柱(100?200目，5 g,内径1 cm),依次 以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7 ： 3)各20 mL进行洗脱对 苦参药材供试液进行处理，该方法优化洗脱溶剂使用种类和 数量，并优化了苦参药材中苦参碱和氧化苦参碱含量测定的 色谱条件，将2010年版《中国药典》中流动相条件乙睛-无 水乙醇-3%磷酸溶液(80 : 10 : 10)优化为乙睛-无水乙醇-3% 磷酸溶液(84 ： 6 ： 10)；简化了 2010年版《中国药典》规 定苦参药材供试液的前处理，缩短了样品处理时间，减少了 洗脱溶剂，结果更为准确可靠，适合苦参药材中含量的测定, 提高苦参药材中苦参生物碱含量测定的工作效率。 关键词苦参；固相萃取柱；方法优化 收稿日期2013-03-04 通信作者 *郭宝林,Tel: (010) E-mail： guobaolin010@163. com 作者简介 杨霞，Tel: ( 0355 ) 8096033, E-mail： yangxiaxy@yeah. net 苦参为常用中药，来源于豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根，具有清热燥湿、杀虫利尿之功 效。苦参含有生物碱类、黄酮类等多种化学成分，其中生物 碱类中的苦参碱(matrine)＞氧化苦参碱(oxymatrine)是 2010年版《中国药典》规定的苦参药材质量控制成分。文献 报道苦参生物碱的含量测定方法中，大多参照2010年版《中 国药典》方法[1-2],部分用酸碱处理和液液萃取的方法 [3-4],也有直接提取液进样检测的报道[5-6],但后者样液 杂质多，影响色谱柱的寿命。固相萃取(SPE)是20世纪80 年代发展起来的一项样品萃取技术。已经广泛应用于药品、 代谢物、食品成分检测和环境监测等方面，但在药典中的中 药样品前处理应用尚不够普及[7-10] o2010年版《中国药典》 记载的苦参含量测定过程中采用开放的中性氧化铝萃取柱 进行样品前处理，洗脱时间长，洗脱剂用量多，难以满足生 产实践及科学研究中大量苦参样品的含量测定。本实验利用 SPE柱代替中性氧化铝开放柱，旨在除去药材中的部分杂质 以保护色谱柱的使用寿命；相比药典记载的中性氧化铝柱， SPE柱简化苦参药材前处理过程，提高工作效率。 1材料 PerkineElmer 高效液相色谱仪(Flexar LC pump, Flexar PDA Detector, Flexar Solvent Manager, Totalchron 工作 站)；Cleanert Alumina-N-SPE 固相萃取柱(Agela 公司)； SHANGPINGFA2104 (1/1 万)电子天平。 乙月青（色谱纯，美国Honeywel 1公司）；娃哈哈纯净水; 无水乙醇（色谱纯，天津市丰越化学品有限公司）；其他试 剂均为分析纯。苦参碱、氧化苦参碱对照品为山西振东光明 研究院制备，用于含量测定（面积归一法测定质量分数分别 为 99.84%, 98.55%）O 苦参药材样品1?4来自于山西长治振东道地药材开发 有限公司中药材公司苦参种植基地的不同采集点，样品5来 自于河南卢氏野生药材，均由中国科学院药用植物研究所郭 宝林研究员鉴定。 2方法和结果 1色谱条件及优化 Venus订 XBP NH2 色谱柱（4.6 mmX250 mm, 5 um）, 检测波长为220 nnio作者发现在2010年版《中国药典》记 载的流动相条件下，即乙睛-无水乙醇-3%磷酸溶液 （80 : 10 : 10）,氧化苦参碱峰前位有杂质小肩峰，流动相 条件调整为乙膳-无水乙醇-3%磷酸溶液（84 ： 6 ： 10）时， 氧化苦参碱和小峰的得到良好分离，氧化苦参碱的出峰时间 仅加长了大约3 min,见图lo因此确定后者为本实验的色 谱条件。 2.2对照品溶液的制备 精密称取苦参碱对照品25.0 mg,氧化苦参碱对照品24.7 mg,分别加乙惰-无水乙醇 （80 : 20）溶解定容到50 mL量瓶中作为储备液，对照品 色谱图见图lo 1?苦参碱；2?氧化苦参碱；A.对照品；B：药材。 图1苦参碱和氧化苦参碱对照品的HPLC图 Fig. 1 HPLC of matrine and oxymatrine reference substance2. 3固相萃取法制备供试液方法的建立 2. 3. 1固相萃取法和药典样品处理方法的比较药典样 品处理方法参考文献［11］。 选择与2010年版《中国药典》方法使用填料量相近的 Clea