饲料中粗蛋白的测定.ppt

饲料中粗蛋白的测定 常用方法 国标法 凯氏定氮仪法 强碱直接蒸馏法 双氧水法 样品的采集、制备 生产单位有代表性的原料检样：鱼粉、玉米蛋白粉、豆粕 采用四分法将检样缩至500g，粉碎后通过40目筛，装于密闭容器中，防止试样成分变化或变质 国标法 实验原理 国标法测定试样中含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化为硫酸铵，加入碱进行蒸馏使NH3 逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，测出含氮量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白的含量。 实验试剂 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮； 混合催化剂：0.4gCuSO4，6gK2SO4 或 Na2SO4 均为化学纯，磨碎混匀； NaOH：40% 水溶液，化学纯； 硼酸：2% 水溶液，化学纯； 混合指示剂； 0.1mol/LHCl标准溶液； 0.02mol/LHCl标准溶液； 蔗糖：分析纯； 硫酸铵：分析纯，干燥； 硼酸吸收液。 仪器 实验用样品粉碎机或研钵； 40目分析筛； 分析天平； 电炉； 酸式滴定管； 凯氏蒸馏装置； 凯氏定氮装置 操作步骤 试样的消化 称取试样 0.5 ～ 1g（含氮量5 ～ 80mg），准确至0.0002g，小心无损的将样本放入 100mL洗净烘干的凯氏烧瓶中。加入 6.4g 混合催化剂与试样混合均匀，再加入 12mL 硫酸和两粒玻璃珠。将凯氏烧瓶置于通风厨里的电炉上加热，开始加热时，先用小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力，消化时经常转动消化瓶，使全部样本浸入硫酸内，如有黑色油在瓶壁，应待烧瓶冷却后加少量蒸馏水冲洗，再继续加热消化。如有黑炭粒不能全部消化，则待烧瓶冷却后，补加少量硫酸加热，直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热至消化完毕。 氨的蒸馏 试样消煮液冷却后加入20mL蒸馏水，转入100mL 容量瓶内，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有 20mL 硼酸吸收液和 2 滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴、硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，以防漏气。蒸馏4min后降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。 空白测定 称取蔗糖0.5g，代替试样，按照前面的消化蒸馏方法进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过 0.2mL，消耗 0.2mol/L 的盐酸标准溶液不得超过0.3mL。 滴定 蒸馏后的吸收液立即用 0.1mol/L 或0.2mol/L标准盐酸溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色。同样滴定试剂空白消化液。 结果计算 粗 蛋 白 质 含 量（%）= （V-V0 ）×N ×0.014×6.25×100 [M×(V 2／V 1)] 式中： V—滴定样品吸收液时所消耗的盐酸标准溶（mL)； V0 —空白测定吸收液所消耗的盐酸标准溶液（mL) ； V1 — 样品消化液总的体积（mL）； V2 —从100mL消化分解液中吸取的消化液体积（mL)； 0.014—氮的毫克当量数； M—样品的质量（g）； N—盐酸标准溶液当量浓度 凯氏定氮仪法 试剂 同凯氏定氮测粗蛋白法 仪器 自动或半自动定氮仪 操作步骤 试样的消化 称取试样 0.5 ～ 1g（含氮量5 ～ 80mg），准确至0.0002g，放入消化管中，加两片消化片（仪器自备）或6.4g混合指示剂、12mL硫酸，于420℃在消煮炉上消化1h，取出放凉后加入30mL蒸馏水。 氮的蒸馏 采用定氮仪，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以 25mL 硼酸为吸收液，加入两滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化管中加入 50mL 氢氧化钠溶液进行蒸馏。蒸馏时间以流出的液体呈中性为宜，可用pH试纸测试。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。 滴定 空白测定 计算 （同国标法） 强碱直接蒸馏法 强碱直接蒸馏法 (Direct Distillation，俗称DD法)是间接测定饲料中粗蛋白质的一种简便的方法。 实验原理 其原理是将粉碎的饲料样品在强碱中消煮，使饲料中的 α- 氨基、酰氨基以及某些特殊基团上