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选修三 现代生物科技专题 专题一 基因工程 1.基因工程的概念:按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外 和 等技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 2.基因工程的基本操作工具 质粒载体 质粒是细菌拟核DNA外的环状DNA小分子,可在细菌间转移。质粒是常用的转基因载体。 2.基因表达载体的构建 (1)基因表达载体的组成:除目的基因外,还必须有 、终止子和 等。 ①启动子:是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因首端,是 识别和结合的部位。 ②标记基因的作用:鉴定受体细胞中是否含有 ,从而将含 的细胞筛选出来。 (2)构建过程: 3.将目的基因导入受体细胞 4.目的基因的检测和鉴定 首先要检测转基因生物的 上是否插入了目的基因,其次还要检测目的基因是否转录出了 ,最后检测 ,有时还需进行 的鉴定。 病毒载体 病毒很适合用于基因治疗。病毒的蛋白质外壳内能容纳多达7500个碱基的DNA片段。当病毒侵染宿主细胞并在细胞内增殖时,也将重组DNA带入到细胞中。病毒已经用于多次基因治疗的临床实验。这种方法存在的问题是宿主对病毒的免疫反应。 显微注射 DNA可以通过显微注射转入动物细胞中。下图所示的是目的基因的多份拷贝正通过玻璃微型吸管注射到受精卵中。转基因小鼠和家畜都是利用这种方法产生的,但是成功率很低;只有2%~3%的受精卵发育成转基因动物,在这些动物只有一小部分表达了转入的基因。 基因枪法 这种方法是利用压缩气体产生的动力将包裹在金属颗粒表面的外源DNA打入生物组织中。常用的金属颗粒有金粉粒子或钨粉粒子。一些细胞能像表达自身基因一样表达导入的外源DNA。 1.基因工程的应用 2.蛋白质工程 (1)概念:指以蛋白质分子的 及其与 的关系为基础,通过基因修饰或 ,对现有蛋白质进行改造,或制造一种新的蛋白质,以满足人类的生产和生活的需求。 (2)方法步骤:预期蛋白质功能→设计预期蛋白质结构→推测应有的 序列→找到对应的 。 (2)切割后末端的种类:DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——黏性末端和平末端(如图所示)。当限制酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA的两条链分别切开时,产生的是黏性末端,而当限制酶在它识别序列的中轴线处切开时,产生的则是平末端。 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 (1)几种酶的比较 (2)DNA连接酶与限制酶的关系 3.“分子运输车”——载体 (1)载体具备的条件 ①对受体细胞无害,不影响受体细胞正常的生命活动; ②具标记基因,能对重组DNA是否进入受体细胞进行鉴定; ③能自我复制,通过复制进行基因扩增; ④具有多个酶切位点,供外源基因插入其中,而且每种酶切位点最好只有一个,避免酶切后环状DNA打开,丢失某些片段。 (2)最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 (3)其他载体:λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 下列关于基因工程的叙述,错误的是 ( ) A. 目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B. 限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C. 人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D. 载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达 [解析] 人胰岛素原基因可以在大肠杆菌体内得以表达,但是由于大肠杆菌是原核生物,没有内质网、高尔基体等细胞器的加工,因此在大肠杆菌中表达后无生物活性。载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞,但由于它和目的基因是相互独立的,并不能促进目的基因的表达。 [答案] D 1.获取目的基因 (2)人工化学合成:适用于分子较小的基因。 2.基因表达载体的构建——基因工程的核心 (1)目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时使目的基因能够表达和发挥作用。 (2)方法 3.将目的基因导入受体细胞 4.目的基因的检测与鉴定 [2011·海南]回答有关基因工程的问题: (1)构建基因工程表达载体时,用不同类型的限制酶切割DNA后,可能产生黏性末端,也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接,则应选择能使二者产生________(相同,不同)黏性末端的限制酶。 (2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时,构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等,其中启动子的作用是________。在用表达载体转化大肠杆菌时,常用________处理大肠杆菌,以利于表达载体进入;为了检测胰岛素基因是否转录出了m
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