呼吸系统疾病动物模型1（吉林大学）.pptVIP

有关哮喘病因、发病机制的探索、新药疗效的评价，在相当程度上需要在动物模型上进行。哮喘动物模型主要有过敏性、致痉剂性、感染性、职业性、运动性及转基因动物哮喘模型等，其中以过敏性和致痉剂性哮喘模型应用较多。 过敏性哮喘模型概述 (一)腹腔注射致敏剂豚鼠模型:ip 10%卵清蛋白,2周后超声雾化0.5%~1%卵清蛋白 (二)腹腔注射致敏剂大鼠模型:ip 卵清蛋白+佐剂, 2周后超声雾化1%卵清蛋白 (三)多点注射致敏剂大鼠模型:第1天和第8天在大鼠多点皮下注射卵清蛋白+佐剂，同时ip,2周后超声雾化1%卵清蛋白 (四)小鼠过敏性哮喘模型: 一、过敏性哮喘模型 [造模原理] 过敏性哮喘(allergic asthma)的发病机制涉及引起过敏的抗原。抗原一般具备两种特性： 一是免疫原性，即能刺激机体产生免疫应答，包括特异性抗体和致敏T细胞； 二是抗原性，系指能与抗体或致敏T细胞在体内外发生特异性结合。 凡同时具备以上两种特性的抗原称为完全抗原，又称免疫原。只能与抗体结合而不能刺激产生抗体者，称为不完全抗原或半抗原，多为简单的小分子物质。 引起超敏反应的抗原称为变应原。 过敏性哮喘模型的复制需要致敏和激发两个步骤。动物以卵清蛋白(ovalbumin，卵白蛋白)为致敏的抗原(有时并用免疫佐剂如氢氧化铝、灭活百日咳杆菌菌苗等)，经腹腔或皮下注射，刺激机体产生IgE，并结合在肥大细胞等细胞表面，使机体处于致敏状态。 一定时间后当动物再次接触到相同抗原后，发生I型速发型过敏反应，呼吸道粘膜肥大细胞等合成并释放多种生物活性物质，引起支气管平滑肌收缩、粘液分泌增多、血管通透性增高和炎症细胞浸润等(激发)，导致哮喘发作。 (一)腹腔注射致敏剂豚鼠模型(√) [动物、试剂与器材] 体重250~300g豚鼠，雌雄不限。10%和0.5%~1%卵清蛋白生理盐水溶液；超声雾化器。 [操作方法] 1.致敏 腹腔注射10%卵清蛋白生理盐水溶液1.0ml（含卵清蛋白100mg）使豚鼠处于致敏状态。 2.激发 注射卵清蛋白后2周，将豚鼠置于密闭有机玻璃箱内，用0.5%~1%卵清蛋白生理盐水溶液超声雾化吸入30s~2min，诱发豚鼠哮喘发作。 3.支气管-肺泡灌洗。 [结果及模型评价] 1.豚鼠可出现气喘表现，咳嗽、烦躁、口唇和四肢紫绀，呼吸费力挣扎，呼吸频率加快和呼吸加深。病理检查可发现肺毛细血管扩张、嗜酸性粒细胞浸润和腺体分泌亢进。 2.豚鼠是能最好显示气道高反应性的动物，其哮喘发作与人类的表现相似。 3.用于复制过敏性哮喘动物模型的抗原物质主要有卵清蛋白、蛔虫卵、尘螨、豚草花粉、真菌孢子、蟑螂等。卵清蛋白为蛋清提取物，免疫原性强，来源方便，价格低廉，最常用于复制哮喘模型。 4.卵清蛋白激发豚鼠哮喘发作是目前国内外常用的方法，操作简单，可重复性强。本模型主要用于哮喘发病机制研究和治疗效果观察。动物每日引喘1次，反复10~14d，可成为哮喘慢性发作模型。 5.本模型最大的缺点是豚鼠对卵清蛋白反应的个体差异很大，少数豚鼠可能不出现哮喘反应，而一些动物则可发生急性过敏性休克。 [注意事项] 1.宜选用等级高、溶解性好的卵清蛋白。 2.超声雾化器应气雾流量较大、雾化颗粒较小。 3.激发用的抗原量和吸入时间非常重要，雾化吸入的卵清蛋白溶液必须用较低浓度，以减少动物死亡。 4.动物一旦出现腹肌明显收缩，应立即将其移出有机玻璃箱，以免因窒息而死亡。 5.注射抗原致敏时，最好用腹腔注射、腹腔注射加皮下注射或皮下注射，激发时采用雾化吸入或呼吸道滴入。配合使用免疫佐剂如氢氧化铝、百日咳杆菌疫苗等效果更好。 (二)腹腔注射致敏剂大鼠模型(√) [动物、试剂与器材] 国外多用Brown-Norway大鼠，国内多用SD或Wistar大鼠。4~6周龄、体重120~180g的雄性SD或Wistar大鼠。致敏剂配制：每ml含卵清蛋白100mg、灭活百日咳杆菌疫苗5×109个和氢氧化铝干粉100mg，需新鲜配制；超声雾化器。 [操作方法] 1.致敏 模型组每只大鼠腹腔注射致敏剂1ml，正常对照组以生理盐水代替卵清蛋白致敏。 2.激发 致敏后2周用超声雾化器向雾化箱内喷雾1%卵清蛋白，使动物吸入20 min,激发哮喘。以后每日定时激发1次，共7d。 3.将动物随机分为正常对照组、模型组、阳性对照药组及三个剂量受试药治疗组。正常对照组用等体积NS代替卵清蛋白进行致敏和激发。受试药可于致敏前、致敏同时或致敏后给予。阳性对照药可选用异丙