无菌检查操作规程.doc

无菌检测室消毒操作规程 目的：建立一个无菌检测室消毒操作程序 范围：适用于需消毒的无菌检测房间 责任：质检科无菌岗位人员 程序： 4.1消毒前准备和用具 4.1.1.能形成雾状的喷壶，配制消毒剂的器皿。 4.1.2 4.2试液 4.2.1 4.1.2.灭菌生理盐水：0.9%氯化钠溶液 3 84消毒液（1:100）水溶液 4.1.2.4 500mg/L碘伏溶液 4.1.3培养基 4.1.3.1.培养基的制备 培养基可按以下处方制备，也可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2～25℃ 4.1.3.1.1硫乙醇酸盐流体培养基(用于培养好氧菌、厌氧菌) 取硫乙醇酸盐流体培养基干粉29g(或照干粉培养基配制说明书进行配制)，加纯化水1000ml，加热至溶解，分装，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化 层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。经115℃±2 种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃ 硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃ 4.1.3.1.2改良马丁培养基（用于培养真菌） 取改良马丁培养基干粉28g(或照干粉培养基配制说明书进行配制)，加纯化水1000ml，加热煮沸至全部溶解，分装，经115℃±2 改良马丁培养基置23～28℃ 4.1.3.1.3营养肉汤培养基 取营养肉汤培养基干粉18g(或照干粉培养基配制说明书进行配制)，加纯化水1000ml，加热至全部溶解，分装，经115℃±2 4.1.3.1.4营养琼脂培养基 取营养琼脂培养基干粉31g(或照干粉培养基配制说明书进行配制)，加纯化水1000ml，加热煮沸直至完全溶解，分装，经121℃±2 4.1.3.2培养基的适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或供试品的无菌检查同时进行。 4.1.3.3无菌性检查 每批培养基随机取不少于5支（瓶），培养14天，应无菌生长。 4.1.3.4灵敏度检查 4.1.3.4.1菌种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。 4.1.3.4.1.1金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B) 26 003] 4.1.3.4.1.2铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC(B) 10 104] 4.1.3.4.1.3枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63 501] 4.1.3.4.1.4生孢梭菌（Clostridium sporogenes）[CMCC(B) 64 941] 4.2.4.1.5白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F) 98 001] 4.1.3.4.1.6黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC(F) 98 003] 4.1.3.4.2菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，23～28℃培养24～48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～ 4.1.3.4.3培养基接种 取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不作为空白对照，培养 3天； 取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。 4.1.3.4.4结果判断 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。 4.1.4稀释液、冲洗液及其制备方法 稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。 4.1.4.1 0.1%蛋白胨水溶液 取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节 pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。 4.1.4.2 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 取磷酸二氢钾3.56g、磷酸氢二钠7.23g、氯化钠4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。 4.1.4.3如需