细胞核的分离和鉴定.pptVIP

09级临床K-8班 梁媛媛 一、原理 细胞内各种结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内其沉降速度也不同，所以，常用不同介质和不同离心力离心，将细胞内各细胞器和组分分级分离出来。细胞器沉降先后顺序是细胞核、线粒体、溶酶体和其他微体、核糖体和大分子。 细胞核的比重和大小与细胞内其他组分不同。分离细胞核最常用的方法是将组织制成均浆，在均匀的悬浮介质中进行用特定的离心力进行离心、分离。 匀浆是指在低温下，将组织块放入匀浆器，加入等渗浆介质进行研磨，破碎细胞，使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆液。 二、实验用品 ⑴材料：小白鼠肝脏 ⑵试剂：生理盐水、0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液、1%甲苯胺蓝染液。 ⑶仪器设备：显微镜、普通离心机、天平、离心管、滴管、玻璃漏斗、量筒、25毫升烧杯、解剖剪、镊子、冲洗瓶、纱布、玻璃匀浆器、载玻片、盖玻片、染色盘架。 三、操作流程 断头处处死小白鼠 取鼠肝1g 匀浆过滤 用8层纱布过滤匀浆液于离心管中 离心 2500r/min离心15min 四、注意事项 ⑴断头处处死小白鼠时尽量时腹内血液流出，并在生理盐水中反复洗涤，避免血细胞对实验结果的影响。 ⑵尽可能充分剪碎肝组织，缩短匀浆时间，整个分离过程不宜过长，以保持组分生理活性。 ⑶将匀浆液置于蔗糖溶液上层时要沿管壁小心加入，同时及时离心，以防止浆液中的颗粒自然下沉过快，影响后面的离心分层效果。 ⑷涂片制作过程中把握好涂片的力度，不可太厚。 ⑸染色后的洗涤要注意时间，不可过长，避免将染色洗去，观察不到细胞核。 五、实验结果 ②涂片在高倍镜下可见肝细胞核已游离出来，倍染成蓝紫色、圆形、中央有2—4个甚至更多个深蓝色的核仁。 细胞核呈紫红色，上面附着少量胞质及浅蓝色碎片。 * * 取上清液1（制一张涂片① ） 剩余上清液，沉淀（细胞核及碎片）并制成悬液 上清液2(制一张涂片②,自然干燥) 染色（在①②涂片上滴加甲苯胺蓝染液） 染色5—7min 洗涤 镜检