院感细菌培养操作.docx

目的 : 医院是病原微生物较集中 , 抵抗力低的人群密集的地方 , 加之化疗、放疗等手段的采用，影响病人免疫机能下降，大量使用抗生素，引起耐药菌株增多，菌群失调，以及先进 医疗仪器广泛应用等原因， 增加消毒灭菌的难度， 致使院内感染已成为当前医疗实践的严重 障碍， 直接影响医疗效果。进一步规范院内感染监测标本的程序， 更好、更快检测病原微生 物的生长情况，预防医院感染的发生。 设备、试剂与材料 2.1 VITEK 2 compact 鉴定药敏分析系统 2.2 VITEK 32 鉴定药敏分析系统 2.3 美国 FORMAⅡ级生物安全柜 2.4 显微镜 2.5 酒精灯 2.6 接种环 2.7 恒温培养箱 2.8 各种培养基 2.9 革兰氏染色液 2.10 触酶试剂 2.11 氧化酶试剂 2.12 移液器 2.13 无菌吸嘴 院感标本采集 3． 1 空气的采样 3． 1． 1 采样时间 选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。 3． 1． 2 采样高度 与地面垂直高度 80-150CM。 3． 1． 3 布点方法 室内面积＜ 30m2，设一条对角线上取三点，即中心一点，两端各距墙 1m 2 处各取一点；室内面积＞ 30m，设东、西、南、北、中 5 点，其中东、西、南、北点均距墙 1m。 3． 1． 4 采样方法 用 9cm 直径普通营养琼脂平板在采样点暴露 5min 后送检。 3． 2 物体表面采样 3． 2． 1 采样时间 选择消毒处理后 4 小时内进行采样。 3． 2． 2 采样面积 2 2 2 被采表面＜ 100cm ，取全部表面；被采表面＞ 100cm，则取 100cm。 3． 2． 3 采样方法 用 5× 5 cm2 的标准来灭菌规格板，放在被检物体表面，用无菌规格板， 放在被检物体表面， 用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子 1 支，在规格板内横竖往返各涂抹 5 次，并随之转动棉拭子，连续采样 1-4 个规格板面积，剪支手接触部位，将棉拭子放入装 10ml 采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。 3． 3 医护人员手采样 编写 谭 南 审核 袁春雷 批准 王冬娥 3． 3． 1 采样时间 在接触病人、从事医疗活动前进行采样。 3．3．2 采样面积及方法 被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一枝在双 2 手指曲面从指跟到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积 30 cm），并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位， 将棉拭子放入装有 10ml 采样液的试管内送检。 采样面积按平方厘米 （ cm2） 计算。 3． 4 医疗用品采样 3． 4． 1 采样时间 在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。 3．4．2 采样方法 右用破坏性方法取样的医疗用品，如输液 （血）器、 注射器和注射针等， 取其中的一部分放培养液中培养。 对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品， 可用浸有无菌 生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面＜ 100cm2，取全部表面；被采 2 2 表面≥ 100cm，取 100cm。 3． 5 使用中消毒剂的采集 3． 5． 1 采样时间 采取使用中的消毒剂。 3． 5． 2 采样方法 在无菌条件下，用无菌注射器抽取 1ml 被检样品，加入 10ml 稀释液混 匀。（对于醇类与酚类消毒剂稀释液用灭菌生长盐水；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧 化物消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入 0.1%硫代硫酸钠；对于洗必泰、季铵盐类消毒剂， 需在灭菌生理盐水中加入 3%（ w/v）吐温 80 和 0.3%卵磷脂；对于醛类消毒剂，需在灭菌生 理盐水中加入 0.3%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入 3%（ w/v ）吐温 80，以中和被检样液的残效作用。 ） 3． 6 内镜的采样 3． 6． 1 咽喉镜、支纤镜 用 10ml 戊二醛中和液冲洗内镜后，送检实验室。 3． 6． 2 胃镜、消化镜、宫腔镜 用 10ml0.1%硫代硫酸钠中和液冲洗内镜后，送检实验室。 3． 6． 3 鼻咽镜、过氧化氢消毒的腔镜类 用 10ml 生理盐水中和液冲洗内镜后，送检实验 室。 3． 7 透析液的采样 用灭菌的空试管取透析液 10ml 送检。 院感标本的运送及交接签收 4． 1 标本的采集 4． 1．1 空气标本的采集由临床科室负责完成，标本采集完毕，由临床各科在规定的时间内 将标本安全送回实验室。 4． 1．2 物体表面、医务人员手、消毒剂、内镜等由院感科负责组织采样，在规定时间内将 标本安全送达实验室。 4． 2 采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过 6 小时，若样品保存 于 0-4 ℃条件时，送检时间不得超过 24 小时。 4．