第5章-离子交换层析.pptVIP

第五章　离子交换层析 离子交换层析是利用离子交换剂上的可交换离子与周围介质中被分离的各种离子间的亲和力不同，经过交换平衡达到分离的目的的一种柱层析法。 离子交换层析具有灵敏度高，重复性、选择性好，分析速度快等优点，是当前最常用的层析法之一。 1848年，Thompson 等人在研究土壤碱性物质交换过程中发现离子交换现象。本世纪40年代，出现了具有稳定交换特性的聚苯乙烯离子交换树脂。50年代，离子交换层析进入生物化学领域，应用于氨基酸的分析。目前离子交换层析仍是生物化学领域中常用的一种层析方法，广泛的应用于各种生化物质如氨基酸、蛋白、糖类、核苷酸等的分离纯化。 第一节 基本原理 在水中呈不溶解状态，能释放出反离子。同时它与溶液中的其他离子或离子化合物相互结合，结合后不改变本身和被结合离子或离子化合物的理化性质。 　　离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要是以离子交换方式进行。所进行的离子交换反应是可逆的。假定以RA代表阳离子交换剂，在溶液中解离出来的阳离子A+与溶液中的阳离子B+可发生可逆的交换反应，反应式为： 　　　　　 RA + B+?→RB + A+ 　 该反应能以极快的速率达到平衡，平衡的移动遵循质量作用定律。 示意图（离子交换过程） 电离基团（磺酸根） 　 离子交换剂对溶液中不同离子具有不同的结合力，结合力的大小取决于离子交换剂的选择性。 离子交换剂的选择性可用其反应的平衡常数K表示： K＝[RB][A+]/[RA][B+] 　 如果反应溶液中[A+]等于[B+]，则K＝[RB]/[RA]。 若K1，即[RB][RA]，表示离子交换剂对B+的结合力大于A+ ； 若K=1，即[RB]＝[RA]，表示离子交换剂对A+ 和B+的结合力相同； 若K1，即[RB][RA]，表示离子交换剂对B+的结合力小于A+。 K值是反映离子交换剂对不同离子的结合力或选择性参数，故称K值为离子交换剂对A+和B+的选择系数。 影响离子交换选择性的因素 水合离子半径：半径越小，亲和力越大； 离子化合价：高价离子易于被吸附； 溶液pH：影响交换基团和交换离子的解离程度，不但影响交换容量；对交换选择性影响亦大。 离子强度：越低越好； 有机溶剂：不利于吸附； 交联度、膨胀度、分子筛：交联度大，膨胀度小，筛分能力增大；交联度小，膨胀度大，吸附量减少； 树脂与粒子间的辅助力：除静电力以外，还有氢键和范德华力等辅助力； 离子交换机理 A+自溶液中扩散到树脂表面 A+从树脂表面进入树脂内部的活性中心 A+与RB在活性中心上发生复分解反应 解吸附离子B+自树脂内部扩散至树脂表面 B+离子从树脂表面扩散到溶液中 交换速度的控制步骤是扩散速度，不同的分离体系可能由内部扩散或外部扩散控制 影响交换速度的因素 颗粒大小：愈小越快 交联度：交联度小，交换速度快 温度：越高越快,与扩散系数增加有关 离子化合价：化合价越高，扩散速度小 离子大小：越小越快 搅拌速度：在一定程度上，越大越快 溶液浓度：当交换速度为外扩散控制时，浓度越大，交换速度越快 离子交换层析的基本原理 第二节 离子交换剂的分类及性质 　　一、离子交换剂的类型 　 根据离子交换剂中基质的组成及性质，可将其分成两大类：疏水性离子交换剂和亲水性离子交换剂。 　(1)疏水性离子交换剂 　 是一种与水亲和力较小的人工合成树脂，最常见的是由苯乙烯与交联剂二乙烯苯反应生成的聚合物，在此结构中再以共价键引入不同的电荷基团。由于引入电荷基团的性质不同，又可分为阳离子交换树脂、阴离子交换树脂及螯合离子交换树脂。 ① 阳离子交换剂： 　阳离子交换剂的电荷基团带负电，反离子带正电，可与溶液中的阳离子或带正电荷化合物进行交换反应。 依据电荷基团的强弱，可分为强酸型(带磺酸的基团，R－SO3H)、中强酸型（含磷酸基团或亚磷酸基团，R－PO3H2）及弱酸型（带羧基和酚基的树脂， R－COOH或R－苯环－OH）三种。 这些交换剂在交换时，氢离子为外来的阳离子所取代，如下式所示： R－COOH＋Na+＝R－COONa＋＋H+ ②阴离子交换剂 此类交换剂是在基质骨架上引入季胺[-N (CH3)3]、叔胺[-N(CH3)2]、仲胺[-NHCH3]和伯胺[-NH2]基团后构成的。  依据胺基碱性的强弱，又可分为强碱性(含季胺基)、弱碱性(含叔胺、仲胺基)及中强碱性(既含强碱性基团又含弱碱