化学人工酶与生物酶工程(酶学).ppt

第六章 化学人工酶和生物酶工程 化学人工酶： 生物工程酶 酶的非水相催化： 第一节 化学人工酶 化学人工酶是根据酶的催化机理，模拟天然酶的生物催化功能，利用有机化学和生物学方法合成的具有专一催化功能的酶模拟物；依据合成方法，又分为半合成酶和全合成酶，抗体酶就是一种特殊的全合成酶；此外，科学家还根据有关酶和辅酶的知识，用有机化学合成的方法设计、合成比辅酶分子更小简单的辅酶模型化合物，研究其在非酶促条件下的反应活性和催化机理。 一、人工酶(Artificial Enzyme) （化学）人工酶：是根据酶的催化机理，模拟天然酶的生物催化功能，利用有机化学和生物学方法合成的具有专一催化功能的酶模拟物。 依据合成方法，又分为半合成酶和全合成酶 二、半合成酶（Semisynthetic Enzyme) 半合成酶：将具有一定结构和功能的物质与特异的蛋白质相结合，形成的一类新的生物催化剂。 半合成酶的合成方法有两种： 1、将具有催化活性的金属或金属有机物与具有特异性的蛋白质相结合； 2、将具有特异性的物质与具有催化功能的酶相结合。 三、全合成酶 这类人工酶不是蛋白质（抗体酶除外），而是一些有机化合物通过引入酶的催化基团来控制空间构象，象天然酶那样能选择性地催化化学反应。全合成酶又分为： 小分子有机化合物 ：是利用各种有机分子（如? - 环糊精、卟啉等）和金属离子制备的具有水解、氧化还原或转氨等功能的全合成酶。 抗体酶：具有催化活性的抗体；是利用分子印迹技术制备的人工酶。 人工聚合物酶：制备原理与抗体酶相同，只是以人工聚合物代替了抗体。 （一）小分子有机物全合成酶 ： 是利用各种有机分子（如? - 环糊精、卟啉等）和金属离子制备的具有水解、氧化还原或转氨等功能的全合成酶。 1、氨肽酶全合成酶：由三乙撑四胺的CoⅢ络合物 2、转氨全合成酶：Gly与Ala的西佛氏碱的Cu(Ⅱ)络合物 3、ATP水解全合成酶：［ CoⅢEdda(H2O2)2]- （二）抗体酶（Abzyme): 抗体酶：20世纪80年代以来出现的一种具有催化活性的蛋白质，是利用生物学和化学的成果在分子水平上交叉渗透研究的产物；其本质上是免疫球蛋白，只是在其易变区被赋予了酶的属性，因此抗体酶又称为催化抗体（Catalytic Antibody)。 抗体酶的理论基础： 半抗原与催化性抗体： 抗体酶的制备方法： 分子印迹： 抗体酶的理论基础 抗体与抗原之间的结合具有高度的专一性，这一性质和底物与酶的结合极为类似； Pauling(1948)的过度态结构理论：酶之所以具有催化活性在于其能够结合并稳定反应底物与产物之间的过度态构型，降低了底物分子的能量障碍；而抗体与酶的重要区别在于：抗体结合的抗原只是一个基态分子，因此，抗体没有催化活性； W.P.Jencks(1969)认为：酶分子与其催化反应的过度态在结构和电荷两方面呈互补，即酶分子充当了反应物的模板，使底物分子转变成新的构型；如果抗体能够结合过度态，那么在理论上便能获得催化活性。这一理论的意义在于，如果能够模拟合成出酶催化反应过度态结构的稳定物质，该物质便能与相应的酶紧密结合，并成为酶的抑制剂，这类物质称为酶的过度态类似物。 Lerner(1984)提出：若以过渡态类似物为半抗原， 则其诱发产生的抗体应该与该类似物具有互补构象； 这种抗体与底物结合后，就能够诱导底物进入过渡态 结构，从而引起催化作用。 1986年Lerner研究组在《Science》上发表了抗 体酶研究的实验结果，标志着抗体酶的研究进入 了一个新阶段。 半抗原与催化性抗体 半抗原：是一类小分子化合物，本身不能诱导免疫应答，只有当共价结合到具有免疫性的蛋白质后，注射动物才能诱导出与半抗原特异性结合的抗体。如果半抗原是酶的过度态结构类似物，则有可能获得具有催化活性的抗体，也就是抗体酶。 实 例：以一羧基酯和酰胺的水解为例，根据反应机理，其过渡态应该为一个四面体结构，以具有四面体结构的高能中间类似物作为半抗原，均能获得预期的抗体酶；该抗体酶与过渡态类似物具有完全互补的立体结构。 半抗原设计中应考虑的问题： 产生的抗体是否具有预期的催化活性； 能否刺激机体产生免疫应答。 半抗原结构与催化抗体之间的关系： 半抗原结构中应含有芳香结构：含芳香结构的半抗原具有较强的免疫原性； 催化抗体与半抗原的亲和力：一般认为结合常数Ki应小于10-6mol/L，容易获得高效催化抗体； 诱导羧酸酯、酰胺水解的催化抗体，可以利用具有四面体结构的过渡态类似物作为半抗原； 半抗原的设计应考虑催化反应的环境与反应机制。 抗体酶的制备方法 1、拷贝法：用已知的酶作为抗原对动物进行第一次棉衣,获得抗酶抗体;再用抗酶抗体作为抗原进行第二次免疫获得抗抗体,抗抗体实际上就是具有原来酶活性的抗