高效液相色谱-2013.ppt

* 示差检测器（RID）：灵敏度低 电化学检测器（L-ECD）：稳定性不好，用的较少 蒸发光散射检测器（ELSD）：灵敏度高，通用型 UV RF RID CDD ECD MS 检测限 1ppb 10ppt 100ppb 1ppb 10ppt 1ppb 梯度兼容性 Y Y N N N Y * 广泛使用，稳定 * 1、ppb级，适用于低含量样品，衍生 2、干扰少 检测器 ☆ 检测器作用 用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置 紫外可见检测器（UV/VIS） 二极管阵列检测器（PDA） 示差检测器（RID） 电导检测器（CDD） 荧光检测器（RF） 电化学检测器（L-ECD） 质谱检测器（MS） 蒸发光散射检测器（ELSD） 常用检测器 紫外可见检测器 原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收 定量基础：Lambert-Beer定律，A＝KCL 优点：1）对温度和流速变化不敏感 2）可用于梯度分析 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质 紫外可见检测器 二极管阵列检测器 二十一世纪标准紫外检测器 获得全部紫外波长的色谱信号 色谱信息： 保留时间 常规紫外检测器 紫外光谱 二极管阵列检测器 二极管阵列检测器的优点 1）采集三维谱图 能够获得A、λ、t信息绘制出三维立体色谱图。是钨灯与氘灯的组合光源。 2）峰纯度检验 3）光谱库检索 三维谱图 时间 波长 吸光度 色谱 光谱 示差折光检测器 原理：连续测定流通池中溶液折射率变化以测定试样各组分浓度。 优点：通用型检测器 缺点：1）对温度和压力变化敏感 2）不能用于梯度分析 原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测 优点： 1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一 2）选择性好 3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质 可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系） 荧光检测器 蒸发光散射检测器 蒸发光散射检测器的原理 （4）电化学检测器 常用LC检测器 名称 使用量 商品化 灵敏度 价格 吸光度 71% Yes 100pg-1ng 荧光 13% Yes 1-10pg 电化学 4.3% Yes 10pg-1ng 折光 5.4% Yes 100ng-1μg 电导 ? Yes 500pg-1μg 质谱 ? Yes ? FTIR ? Yes 1μg 光散射 ? Yes98 1ng ? 光离子化 ? No 1pg-1ng ? 元素选择 ? No 10ng ? 色谱工作站界面 数据采集与处理 HPLC分离利用 标准样品法 谱库 HPLC-FTIR HPLC-MS 定性分析 定量分析 峰面积∝浓度或质量 高效液相色谱法的应用和进展 1、在生物化学和生物工程中的应用 2、在医药研究中的应用 3、食品分析 4、环境分析 5、精细化工 思考题 1．何谓反相液相色谱？何谓正相液相色谱？ 2. 在液相色谱法中，梯度淋洗适用于分离何种试样？ 3. 对下列试样，用液相色谱分析，应采用何种检测器： （l）长链饱和烷烃的混合物 （2）水源中多环芳烃化合物。 4. 对聚苯乙烯相对分子质量进行分级分析，应采用哪一种液相色谱法？ 5．什么是化学键合固定相？它的突出优点是什么？ 6．什么叫梯度洗脱？它与气相色谱中的程序升温有何异同？ 7.指出下列各种色谱法，最适宜分离的物质。 （l）气液色谱；(2) 正相色谱；（3）反相色谱；（4）离子交换色谱;（5）凝胶色谱；(6）气固色谱；(7）液固色谱。 高效液相色谱-2013教材 谢谢 * * 经验性学科 * LC GC CE:泳毛细管电泳(capillary electrophoresis, CE)又叫高效毛细管电泳(HPCE), 是近年来发展最快的分析方法之一。 SFC：super critical fluid chromatography，超临界流体色谱。 * * * 光谱纯－色谱纯－优级纯－分析纯－化学纯－工业纯 纯度：HPLC级