DB13_T2593-2017禽腺病毒4型PCR检测方法（规范）.pdfVIP

ICS 11.220 B 43 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB13/T 2593—2017 禽腺病毒4 型PCR 检测方法 2017 - 11 - 22 发布 2017 - 12 - 22 实施 河北省质量技术监督局 发 布 DB13/T 2593—2017 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河北农业大学提出。 本标准起草单位：河北农业大学。 本标准主要起草人：袁万哲、王建昌、孙继国、刘聚祥、李丽敏、陈立功、李睿文、张磊、白云、 陈赛娟、李杰峰。 I DB13/T 2593—2017 禽腺病毒4 型PCR 检测方法 1 范围 本标准规定了禽腺病毒4型PCR检测方法的技术要求。 本标准适用于检测家禽咽喉拭子、肛拭子，发病禽组织和这些采集样品培养物中的禽腺病毒4型。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 DNA 脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid） 2.2 EB 溴化乙锭（ethidium bromide） 2.3 PCR 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction） 2.4 dNTP 脱氧核苷酸三磷酸（deoxy-ribonucleoside triphosphate） 3 试剂或材料 包括各种市售病毒核酸提取试剂盒，1.0%琼脂糖凝胶，50×TAE缓冲液，溴化乙锭（EB，10 ug/μL） 或核酸染料，焦碳酸二乙酯（DEPC）处理的灭菌的双蒸水，DNA分子量标准（100 bp），2×Taq MasterMix 或商品化的一步法PCR反应试剂。 警示:电泳中用到的EB在操作中应戴手套和口罩。试验中被EB污染的物品要进行无害化处理；DEPC 在操作中应在通风条件下进行，使用时戴手套和口罩，不小心沾到皮肤应立即冲洗。 3.1 病毒核酸提取试剂盒。 3.2 1.0%琼脂糖凝胶，配制方法见附录 A 中A.1。 3.3 50×TAE 缓冲液，配制方法见附录 A 中A.2。 3.4 溴化乙锭（EB，10 ug/μ L）或核酸染料，配制方法见附录 A 中A.3。 3.5 焦碳酸二乙酯（DEPC）处理的灭菌的双蒸水，配制方法见附录 A 中A.4。 1 DB13/T 2593—2017 3.6 DNA 分子量标准（100 bp）:包含 100 bp、250 bp、500 bp、750 bp、1000 bp、2000bp 几种分 子量标准。 3.7 2×Taq MasterMix。 3.8 商品化的一步法 PCR 反应试剂：含有 PCR 缓冲液、酶混合物、dNTP 混合物、无 RNA 酶的水等。 3.9 引物：上游引物与下游引物见附录 B 中的表B.1。引物浓度为 10 μ mol/L。 4 仪器设备 4.1 PCR 仪：温度范围 4.0℃～99.9℃；样品基座配置至少包括单个 0.2 mL 孔。 4.2 凝胶成像系统：检测灵敏度 DNA ≥0.1 ng；有效像数 1360×1024、10bit、USB 2.0。 4.3 台式低温