创伤失血性休克大鼠血清及心肌miRNA标志物筛选及机理研究-老年医学专业毕业论文.docxVIP

解放军医学院博士学位论文目 解放军医学院博士学位论文 目 录 缩略词表 ． ．．1 中文摘要 3 英文摘要 6 前言日Ⅱ 舌 ．．一99 第一章大鼠创伤失血性休克动物模型建立及评估 14 第一节大鼠创伤失血性休克动物模型建立及取材 14 1． 材料与方法 ．14 2． 结果 ．．15 3． 结论 ．．15 第二节创伤失血性休克大鼠血清炎症因子检测 16 1． 材料与方法 ．16 2． 结果 ．17 3． 结论 ．．20 第三节创伤失血性休克大鼠心肌巨噬细胞标志蛋白检测 21 1． 材料与方法 ．21 2． 结果 ．．22 3． 结论 ．．24 第二章创伤失血性休克大鼠血清miRNA高通量测序及标志物筛选 ．25 第一节创伤失血性休克大鼠血清miRNA高通量测序及生物信息学分析 ．25 1． 材料与方法 ．25 2． 结果 。28 3． 结论 ．．33 第二节创伤失血性休克大鼠血清差异miRNA验证及相关性分析 ．34 1． 材料与方法 ．34 2． 结果 一36 万方数据 万方数据 万方数据 解放军医学院博士学位论文3． 解放军医学院博士学位论文 3． 结论 ．．39 第三章创伤失血性休克大鼠心肌miRNA高通量测序及标志物筛选 ．40 第一节创伤失血性休克大鼠心肌miRNA高通量测序及生物信息学分析 ．40 1． 材料与方法 ．40 2． 结果 ．．42 3． 结论 ．．46 第二节创伤失血性休克大鼠心肌差异miRNA验证 ．47 1． 材料与方法 ．．47 2． 结果 ．．48 3． 结论 。50 第三节miR-155对心脏的保护作用与巨噬细胞极化的关系 51 1． 材料与方法 5 1 2． 结果 。53 3． 结论 ．．55 第四节miR．155调控巨噬细胞极化的作用机理研究 56 1． 材料与方法 ．56 2． 结果 ．．58 3． 结论 ．．61 讨论 ．．63 参考文献 ．68 综j述 ．．82 攻读学位期间发表论文情况 ．89 致谢! ．90 万方数据 万方数据 解放军医学院博士学位论文缩略词表 解放军医学院博士学位论文 缩略词表 解放军医学院博士学位论文 TGF-? THS transforming growth factor-? traumatic hemorrhagic shock 转化生长因子 -? 创伤失血性休克 TNF-α tumor necrosis factor-α 肿瘤坏死因子 4 TLRs TLR-4 VEGF Toll-like receptors Toll-like receptors Vascular endothelial growth factor Toll 样受体 Toll 样受体-4 血管内皮生长因子 2 解放军医学院博士学位论文作 解放军医学院博士学位论文 作 者： 路艳 学科专业： 老年医学 导 师： 谢晓华 题目：创伤失血性休克大鼠血清及心肌miRNA标志物筛选及 机理研究 中文摘要 目的 创伤失血性休克(Traumatic hemorrhagic shock，THS)作为临床常见疾病之一， 以其发病机制复杂、病程长及死亡率高等特点已被广泛关注，多种细胞炎症因子 参与该过程的调控，但具体机制尚未完全阐明，特别是miRNA参与该过程调控的 具体机制尚需进一步阐明。因此，本文拟采用急性机械性损伤方法建立大鼠THS 模型，结合血清细胞因子和心肌巨噬细胞标志蛋白检测确定最佳检测时间点，给 予miRNA二代测序和生物信息学分析得到THS大鼠血清和心肌表达差异miRNAs ，结合miRNAs生物学功能验证以期获得其参与THS调控的具体机制，为从miRNA 角度诠释THS的预防及治疗提供新的手段和潜在靶标。 方法 首先，基于急性机械性损伤法建立大鼠THS模型，并于造模后0h、1h、2h、 4h、8h、16h、24h、48h收集大鼠血清和心肌组织样本，采用酶联免疫吸附测定法 检测血清肿瘤坏死因子一a(Tumor necrosis factor-alpha，TNF-0【)、白细胞介素 ．2(Interleukin-2，IL-2)、白细胞介素-6(Interleukin．6，IL．6)、白细胞介素 一lO(Interleukin-10，IL一10)等细胞炎症因子表达水平以确定血清miRNA样本最佳检 测时间点；针对心肌巨噬细胞M0、M1和M2型分化标志蛋白CD68，诱导性一氧 化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)和精氨酸酶一1(Arginase一1，ARGl) 气 解放军医学院博士学位论文利用免疫组织化学(Immunohistochemistry，IHC)法检测以确定心肌miRNA样本最 解放军医学院博士学位论文 利用免疫组织化学(