华附土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1天.pptx

倍特（BETTER）生物研学 培养基的配制 培养基组分 提供的主要营养 牛肉膏 5g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素 蛋白胨 10g 碳源、氮源和维生素 琼脂 15~20g 承载物 氯化钠 5g 无机盐 水（定容） 1000ml 氢元素、氧元素 1L牛肉膏蛋白胨固体培养基的营养构成 倍特（BETTER）生物研学 KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 1L固体培养基的营养构成 培养基的配制 倍特（BETTER）生物研学 培养基的配制 1、计算 2、称量 3、溶化：将称好的牛肉膏加少量水溶化，加入称量好的蛋白胨、 氯化钠、琼脂加热溶解，并补加纯水定容至1L。 4、灭菌：高压蒸汽灭菌锅 5、倒平板 土壤中分解尿素细菌的分离与计数 —倍特生物研学 每个孩子都是有创造力的天才! 倍特（BETTER）生物研学 课题背景 尿素是什么？来源？应用？ 倍特（BETTER）生物研学 课题背景 尿素是第一种以人工合成无机物质而得到的有机化合物。 1773年，伊莱尔·罗埃尔（Hilaire Rouelle）发现尿素。1828年，德国化学家弗里德里希·维勒首次使用无机物质人工合成了尿素。本来他打算合成另一种无机物，却得到了尿素。 尿素的合成揭开了人工合成有机物的序幕。 倍特（BETTER）生物研学 皮肤外用药。皮肤科以含有尿素的某些药剂来提高皮肤的湿度。 皮肤角化症，手足皲裂等。 课题背景——医学应用 倍特（BETTER）生物研学 课题背景——医学应用 倍特（BETTER）生物研学 实验室应用：尿素能非常有效的使蛋白质变性，尤其能非常有效地破坏非共价键结合的蛋白质。 课题背景——实验室应用 倍特（BETTER）生物研学 尿素是一种很好用的保湿成分，属于肌肤天然保湿因子NMF的主要成分。用于面膜、护肤水、膏霜、护手霜等产品中保湿成份的添加。添加比例为3-5%。 课题背景——化妆品应用 倍特（BETTER）生物研学 课题背景——农业应用 尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。 如何被植物利用？ 只有被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用。 倍特（BETTER）生物研学 倍特（BETTER）生物研学 各种各样的菌 倍特（BETTER）生物研学 各种各样的菌 倍特（BETTER）生物研学 课程回顾 如何筛选特定菌株？ 倍特（BETTER）生物研学 实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 PCR技术：要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 Taq细菌 启示：寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 筛选原因: 因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，使耐热的Taq细菌保留下来。 倍特（BETTER）生物研学 实验室中微生物的筛选？ 人为提供有利于目的菌株生长的条件 (包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 研究思路——筛选菌种 倍特（BETTER）生物研学 如何筛选特定分解尿素细菌的菌株？ 倍特（BETTER）生物研学 研究思路——分解尿素细菌筛选 选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板等方法对它进行纯化培养分离。 倍特（BETTER）生物研学 研究思路——统计菌落数目 1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 缺点 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 倍特（BETTER）生物研学 2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 研究思路——统计菌落数目 倍特（BETTER）生物研学 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质) 研究思路——设置对照 倍特（BETTER）生物研学 实验设计：分离特定菌株？ 倍特（BETTER）生物研学 实验设计——分解尿素细菌筛选 要分离一种微生物，必须根据该微