丙肝抗体性能评价及真阳性cutoff的建立.ppt

定量精密度验证 丙肝抗体性能评价及真阳性cutoff的建立 丙型肝炎 — 面临的挑战 全球性的公共卫生的问题 肝脏疾病的最重要的原因 全球性流行性疾病 不确定的传播方式 输血，不洁注射，母婴传播，医源性感染，性传播等 30% 感染者感染途径不明 “隐匿”的杀手 50-90% 感染者无症状 30% 感染者ALT正常 通常在筛查中发现 进行性疾病 55-85%的感染者会发展为慢性感染 HCV病毒学特征 黄病毒属1 有衣壳蛋白包裹2 已知6种基因型，80个亚型3 病毒基因组具有高度变异性3 形成不同基因构成的病毒亚群或准种1,4 增殖速度：1012个/天2 1. Purcell R. NIH Consensus Conference on Hepatitis C. 1997; 2. Neumann A, et al. Science 1998; 282: 103; 3. Lauer G Walker B. N Engl J Med 2001; 345: 41; 4. Hoofnagle J. NIH Consensus Conference on Hepatitis C. 1997 衣壳 RNA基因组 病毒颗粒 核心蛋白 中国丙肝临床报告病例逐年递增 中国卫生部公告. 庄辉. 2012世界肝炎日全国丙肝专题会议. 中国目前约有1000万例丙肝感染者 临床报告病例仅是总体患者的冰山一角 中国目前约有1000万例HCV感染者 中国卫生部公告. 庄辉. 2012世界肝炎日全国丙肝专题会议. 超过90%的HCV感染者尚未被发现 历年报告临床病例总和100万例 HCV特征决定准确的检测是疾病管理最重要防线 病毒基因组具有高度变异性 目前尚无预防性疫苗 HCV在体外持久的稳定性 丙肝患者体液污染的器械具有很强的传染性 准确的筛查以及早确诊、规范治疗至关重要 HCV感染诊断实验的选择 方法 筛查 确诊 疗程 疗效的评估 持久性应答预测 ALT ※ Anti-HCV ※ RIBA ※ HCV RNA ※ ※ ※ ※ HCV 基因分型 ※ Anti-HCV 的假阴性和假阳性是困扰实验室重要问题之一 假阳性 不必要的补充确认检测 不必要的就诊和心理伤害 医疗纠纷 假阴性 传播扩散风险 医疗安全风险 延误病情 第三代Anti-HCV 检测试剂精选抗原靶位，提升检测性能 NS3 /Core 抗体出现最早 NS3 抗原在早期诊断和提高灵敏度上都均有重要价值，提高NS3抗原的配比 Core抗原中的N端保守区域易产生交叉反应，适度减少Core抗原的配比 随着重组技术的进展，使原料抗原的活性更强 各种抗原的配比调整 第三代Anti-HCV 的平均窗口期是6-8周； NS3 和 Core 抗体要早于 NS4 和NS5抗体数周时间 第三代试剂中加入Core，NS3，NS4 （部分厂家加入NS5)抗原。 影响试剂性能的主要因素 各种抗原的配比平衡 增加NS3抗原，同时减少核心区抗原 益处： 提升灵敏度 减少了非特异性反应 挑战： “度”的把握 掌握不好，容易漏检 抗原的选择和生产工艺 HCV病毒缺乏有效体外培养系统，难以从病毒中分离出天然抗原；生产的抗原材料与天然抗原的接近度越高，试剂性能越好。 NS3 是构像依赖性抗原，需要使用重组抗原 不同批次间抗原的均一性非常重要； NS4 /Core抗原通常使用合成多肽抗原； Elecsys? Anti-HCV II 全面升级 viral (+) RNA genome viral polyprotein C E1 E2 NS1 NS2 NS3 NS4A NS4B NS5A NS5B structural proteins non-structural proteins 合成肽 合成肽 重组抗原 New! 新的试剂缓冲液 ?减少干扰 ?增强试剂的稳定性 应用指南（2013.4） 检验方法和程序的分析性能验证内容至少应包括：检出限，精密度（包括重复性和中间精密度）、符合率（采用国家标准血清盘或临床诊断明确的阴阳性样本各20份或与其他分析方法比对）；并应明确检验项目的预期用途，如筛查、诊断、确认。 Elecsys? Anti-HCV II 一、性能评价： 1. 精密度 2. 符合性 3. 准确性 二、95%真阳性CUTOFF值的建立 1. 精密度 EP15-A2 实验方案 2 个浓度水平 至少 5 天实验，每天做一批 每批每个水平3 次重复测定 每次重复检测的时间以及检测 顺序不做要求 　 第1次 第2次 第3次 均值 日期/操 作者 袁帅 袁帅 袁帅 　 第1天 0.041 0.040 0.