生化分离技术2 预处理课件.ppt

实验室常用的转子 碟片式离心机 传统离心机。最大处理量达到300m3/h，常用于大规模的分离过程。 适用范围 细菌、酵母菌、放线菌、细胞碎片 碟片式离心机 人工排渣的碟片离心机 喷嘴排渣的碟片离心机 活门（活塞）排渣的碟片离心机 管式离心机 管式离心机是一种分离效率很高的离心分离设备，其转鼓细长，可在15000-50000的高转速下工作，分离因数可达104-6×105。它设备简单、操作稳定。 适用范围： 细胞、细胞碎片、细胞器、病毒、蛋白质、核酸等。特别适合一般分离机难以分离的固形物含量1% 发酵液的分离。 倾析式离心机 是一种靠离心力和螺旋的推动力作用自动连续排渣的离心机。具操作连续、适应性强、结构紧凑和维修方便的优点。 适用范围 特别适合固形物含量较多的悬浮液的分离。 凝聚与絮凝过程有何区别？如何将两者结合使用？ 错流微滤与传统过滤方式有何区别？相比有何优点？ 高压匀浆法：利用高压迫使悬浮液通过针型阀，由于突然减压和高速冲撞造成细胞破裂。在高压匀浆器中，细胞主要经受高速剪切，碰撞和从高压到低压的突变。 纳米级微生物破碎机：高压细胞液流碰撞 并在高速震荡片上破碎成纳米级别的颗粒 超声波破碎法：利用频率高于50kHz的超声波引起的空穴作用，对液体中的细胞产生巨大的剪切和撕裂作用，是一种很剧烈的细胞破碎方法。 破碎率高，操作方便，但是处理的量较小，并且会产生大量热量。同时应注意避免溶液中气泡的存在。处理一些超声波敏感的蛋白质酶时宜慎重。 渗透压法：利用渗透压的突然变化，引起细胞壁和细胞膜的膨胀破裂，是一种比较温和的方法。 适用于较易破碎的细胞，细胞壁经过预先处理的细胞，同时要注意高渗溶液对产品的污染问题 干燥法：菌体经干燥后，细胞膜渗透性发生变化，同时部分菌体自溶，可分为空气干燥，真空干燥，冷冻干燥等。 反复冻融法： 利用水结晶和融化的过程使细胞破碎 成本较高，破碎率不高，并且容易导致生物产品失活 化学法 EDTA 有机溶剂 表面活性剂 化学法的优点在于不会产生大量的细胞碎片，浆液粘度低，溶液较澄清，可实现有选择的释放胞内物质 缺点在于效率较低，时间长，成本较高，并且容易导致污染 生物法破碎 酶溶法：利用相关酶类破坏微生物细胞壁或细胞膜。 噬菌体法 溶菌酶，作用于肽聚糖上的β1-4糖苷键，是目前最常用的细菌融酶 超临界细胞破碎技术 利用超临界流体的萃取和压力差作用，使细胞壁破碎 电脉冲提取法 电脉冲可以导致细胞壁的损伤，使细胞的通透性增加，操作条件温和，时间短，易于控制，并且可以做到不影响细胞生长 多种破碎方法相结合，可以提高细胞破碎率，实现目标产物的精确提取 选择破碎方法的依据 (1)细胞的处理量 (2)细胞壁的强度和结构 (3)目标产物对破碎条件的敏感性 (4) 破碎程度 适宜的操作条件应从高的产物释放率，低的能耗和便于后步提取等方面进行权衡 固液分离技术 收集胞内产物的细胞或菌体，分离除去液相，或者是收集含生化物质的液相，分离除去固体悬浮物，如细胞、菌体、细胞碎片、蛋白质的沉淀物和它们的絮凝体等。 发酵液的固液分离 过滤 离心 膜分离 常规过滤 在一定的压力差下，利用多孔性介质截留固液悬浮液中的固体粒子，进行固液分离的方法称为过滤。 错流过滤 　错流过滤：在泵的推动下料液平行于过滤面流动，与死端过滤不同的是料液流经膜面时产生的剪切力把膜面上滞留的颗粒带走，从而使污染层保持在一个较薄的水平。 错流过滤 过程示意图：料液快速经过薄膜,以减少形成滤饼 特点 a 介质阻力大b 不得到干滤饼 c 需要大的膜面积 d 收率高 （97-98%）e 质量好f 减少处理步骤 过滤介质 无定形颗粒：无烟煤、砂、颗粒活性炭、铁矿砂等 成形颗粒：烧结金属、烧结塑料以及用合成树脂粘结的硅砂、塑料颗粒等，做成圆筒形或板状。 非金属织补棉：化学纤维、玻璃纤维织品、长纤维滤布、短纤维滤布。 金属织布：不锈钢丝或铁丝等的织布。 无纺品：纸、毡、石棉板、合成纤维无纺布等。 助滤剂 在过滤操作中，为了降低过滤阻力，增加过滤速率或得到更澄清的滤液所加入的辅助性的粉粒状物质，称为助滤剂。 其原理是减少滤渣的可压缩性，保持滤饼疏松不至堵塞滤孔。 通常是具有硬度的，惰性的固体颗粒，例如硅藻土，石棉等。 固液过滤分离设备 板框 鼓式真空过滤机 板框压滤机 它最重要的特征是通过过滤介质时产生的压力降可以超过0.1MPa,这是真空过滤器无法达到的。 板框压滤机已有很长历史。 真空转鼓过滤机 真空转鼓过滤机 优点：真空转鼓过滤机