DEAE纤维素离子交换层析法分离血清蛋白.ppt

实验八 DEAE纤维素离子交换层析法分离血清蛋白 实验目的 1. 掌握DEAE纤维素离子交换层析法分离血清蛋白的原理与方法。 2. 熟悉762紫外分光光度计的使用。 思考题 DEAE离子交换层析根据什么原理分离蛋白质？ 为什么要预处理DEAE？ 什么叫阳离子交换剂？阴离子交换剂？ 通过DEAE纤维素32离子交换层析法分离血清蛋白所得收集液第一个蛋白高峰主要是哪一种蛋白？为什么？ 实验原理 离子交换层析是依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的。离子交换层析的固定相是离子交换剂，是由一类不溶于水的惰性高分子聚合物基质通过一定的化学反应共价结合上某种电荷基团形成的。离子交换剂可以分为三部分：高分子聚合物基质、电荷基团和平衡离子。电荷基团与高分子聚合物共价结合，形成一个带电的可进行离子交换的基团。 平衡离子是结合于电荷基团上的相反离子，它能与溶液中其它的离子基团发生可逆的交换反应。平衡离子带正电的离子交换剂能与带正电的离子基团发生交换作用，称为阳离子交换剂；平衡离子带负电的离子交换剂与带负电的离子基团发生交换作用，称为阴离子交换剂。 DEAE纤维素(二乙基氨基乙基，Dicthylaminoethyl，DEAE)是阴离子交换剂。在pH8.0的溶液中，血清蛋白质都解离成为阴离子，可交换结合到DEAE纤维素离子交换