乳与乳制品非常规理化指标检验磷的检测.doc

乳与乳制品非常规理化指标检验磷的检测 YLNB 5.6 1．依据:GB/T5413.22—1997 2．原理 样品经湿法消化后定容，在硝酸溶液中，磷与钒钼酸铵生成黄色的络合物（P2O5.V2O3.22MoO3.3H2O）,其黄色的深浅可用比色法比色测定,其测定范围为磷的浓度在2-20ug/ml之间。 3. 试剂 3.1、硝酸:优级纯。 3.2、硫酸:优级纯。 3.3、高氯酸:优级纯。 3.4、钒钼酸铵试剂: A液:25g钼酸铵［(NH4)6Mo7O24..4H2O］水中,溶于400ml水中。 B液:1.25g偏钒酸铵(NH4VO3)溶于300ml水中,冷却后加250ml浓硝酸,然后将A液缓缓倾入B液中,不断搅拌,并用水稀释至1L,贮存在棕色瓶中。 3.5、氢氧化钠:6mol/L 3.6、二硝基酚指示剂:2g/L. 称取0.2g 2,6-二硝基酚或2,4二硝基酚［C6H3OH(NO2)2］溶于100mL水中。 3.7、磷的标准储备液:50ug/mL 称取0.2197g经烘干的磷酸二氢钾(优级纯),溶于约400ml水中,加25mLH+浓度为12mol/L的硫酸,定容至1L,可长久贮存. 3.8、氢氧化钠：0.1mol/L(作调节颜色用) 3.9、硝酸：0.1mol/L(作调节颜色用) 4. 仪器 4.1 分光光度计 4.2 电热板或可调电炉(带石棉网) 5. 方法 5.1 样品处理, 精密称取0.5000g固体样品或2.5g（或mL）液体乳(可根据磷的含量确定称样量)样品于100mL或150mL三角瓶中,加入几粒玻璃珠,加10mL浓硝酸(4.1),然后放在电热板上加热反应.待剧烈反映结束后取下,冷却,再加入5mL硝酸，5mL硫酸（4.2）和5mL高氯酸（4.3），重新放置在电炉上加热反应，此时应把温度调低些，若消化液变黑，需取下在加5mL硝酸后继续加热，直到消化液变成无色或淡黄色，在消化液剩下3-5mL时取下，冷却，定量地移入50mL容量瓶中，冷却后用水定容至刻度，为待测液，同时作空白实验。 5.2样品测定; 精确吸取样液10 mL（含磷0.2-0.75mg）加少量水，加2滴二硝基酚指示剂（7），用氢氧化钠（6）调至微黄色，再分别加入10.00mL钒钼酸铵试剂（混合后的B液），冷却，加水待冷却后用水定容。在25-30℃下显色15min。 5．3标准曲线的绘制: 5.3.1 精确吸取磷的标准储备液0， 2.5，7.5，10，15，20 ml分别放入50ml容量瓶中，磷的浓度分别为0，2.5， 7.5，10，15，20ug/ml(也可以将磷的浓度在曲线内设的点适当增加，如1，1.5，2，3，4，12.5 ，20，25ug/ml) 5.3.2 分别加少量水后，加2滴二硝基酚指示剂，用6mol/l氢氧化钠调至微黄色，再分别加入10.00ml钒钼酸铵试剂，定容。在25—30°C下显色15分钟。 5.3.3 用1cm比色皿，波长440nm，在分光光度计上测定吸光值，以吸光值为纵坐标，磷含量为横坐标绘制标准曲线或计算回归方程。 6. 结果计算 磷的含量(mg/100g)= c:从标准曲线上查的比色液的浓度，ug/ml; A:样液的稀释倍数; V:样液定容体积; 50 mL m:样品的质量，g 允许差：同一样品两次测定值之差不超过两次测定平均值的5% 7.注意事项 7.1 样品处理必须采用湿法处理，可采用HNO3— H 2SO4 ---HCLO4和HNO3 ---HCLO4,两种方法,但都必须在通风橱中进行. 7.2 实验时要注意安全。硝酸和高氯酸加入的量不能太多，测定液体样品时要在水上蒸干，冰淇淋不能称的太多,一定要加入玻璃珠。 7.3 需要做空白实验。不加样品，其他相同。 7.4 需准确加入钒钼酸铵的量。 7.5 标准曲线的制作，使样品的浓度在曲线范围之内。