原料奶新鲜度和掺杂异物检验方法水解蛋白的检出.doc

原料奶新鲜度和掺杂异物检验方法水解蛋白的检出 YLNB 1.15 1. 器材 1.1 量筒10 mL、100 mL、250 mL 1.2 具塞刻度比色管10 mL 1.3 小烧杯50 mL 1.4 移液管1 mL、5 mL 1.5 滤纸?11 cm 1.6 比色管架 1.7 容量瓶（棕色）250 mL、100 mL 1.8 玻璃棒 1.9 小牛角勺 1.10 吸水纸 2. 试剂 2.1 打底标样（简称“底标”）配制：含3 ‰ 水解蛋白粉奶样配制方法，用精密天平（万分之一感量），用50 mL洁净干燥小烧杯称取水解蛋白粉0.750 g，然后用自产新鲜未掺假牛奶少量多次（每次30-40 mL鲜奶）溶解，并无损转移至250mL容量瓶中，最后用同种鲜奶定容至250 mL刻度，盖上瓶塞，反复颠倒振摇50次以上，以保证充分溶解并混匀。 2.2 5%汞（Ⅱ）盐溶液：用洁净小烧杯在天平上称取硝酸汞（AR级）试剂12.5 g，小心地用10 mL量筒量取4 mL浓硝酸倒入小烧杯中，进而加蒸馏水溶解并无损转移至250 mL棕色容量瓶中（用少许蒸馏水冲洗小烧杯3-4次均转移至容量瓶中），最后用蒸馏水定容至250 mL，摇匀。 2.3 饱和苦味酸溶液：用小牛角勺取苦味酸两小勺，小心地置入100 mL棕色容量瓶中，用洗瓶冲洗试剂至瓶下部，再加入蒸馏水至刻度，反复振摇50次，并放置过夜使之达到溶解平衡即为饱和溶液（注意观察容量瓶底部始终应有固体试剂残留才为饱和状态）。 3.方法 取10 mL具塞比色管若干支，编号后置于比色管架上，用1 mL移液管吸取1.00 mL“底标”奶液注入每支比色管中，再用5ml移液管吸取待测奶样4.00 mL注入加标比色管中，注意记录样号与管号对应关系，然后盖塞充分振荡混匀样品。用另一支5 mL移液管吸取5 %硝酸汞溶液5.00 mL依次加入各样品管中，盖塞摇匀，等待5分钟（在此期间，准备好与比色管相同个数的50 mL洁净小烧杯，折好滤纸置各烧杯上）后，将各比色管中奶样倒入滤纸中进行无漏斗过滤操作，约2分钟后，各烧杯中滤液即达5 mL以上，此时弃去滤纸及其内容物，用另一5 mL移液管分别移取滤液各2.00 mL分别注入另一组（即比色管架上已备好的另一排10mL比色管）中，再用一支5 mL移液管吸取2.00 mL饱和苦味酸溶液分别加入各个盛滤液比色管中，盖塞摇匀，然后在白色或黑白相间或透明空间背景下观察混浊情况，若有淡黄色浑浊出现即为阳性。操作时以未掺假鲜奶做对照，即移取该奶样4.00 mL注入编为“0”号的比色管中，加入5 mL汞盐试液，以下操作同于样品检测。 4. 检测原理及有关说明 4.1 加入汞盐即可使乳中蛋白质变性凝聚，通过过滤操作即可除去，但水解蛋白与汞盐不发生沉淀反应，通过该步骤即可实现乳中固有蛋白与人为加入的蛋白质成分分离。 4.2 因苦味酸具有比汞盐更强的沉淀作用，其与水解蛋白中的碱性基团（氨基）作用即可形成难溶的有机盐类沉淀，故使体系出现浑浊，当水解蛋白粉在奶样中含量高于1 %时，此操作步骤则会较快出现浅黄色沉淀析出的现象。 4.3 任何难溶物均具有与温度密切相关的溶度积常数，水解蛋白粉与苦味酸的作用也不例外，操作中给待检样中加入“底标奶样”是为了提高检测方法的灵敏度，即通过该措施可以达到含量万分之五水解蛋白粉的奶样稳定检出阳性结果的目的。 4.4苦味酸性状：苦味酸化学名称为2，4，6-三硝基苯酚，为黄色晶体或粉末，苦味有毒，密度1.763，熔点122℃，不易吸湿，难溶于冷水，较易溶于热水、乙醇、氯仿、苯和乙醚。具有强烈爆炸性，是军事上最早使用的一种烈性炸药。易与多种金属作用生成更易爆炸且危险的苦味酸盐，能与有机碱生成难溶晶体盐类。本身是一种酸性染料，在工业上也用于制造其它染料和照像药品，在医疗上则做为外科收敛剂。