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DNA的复制与转录DNA Replication and Transcription DNA复制(replication)： 是指 DNA 以自身为模板(template)， 合成新的子代 DNA 分子的过程。 是 遗传信息传递的分子基础。 1.半保留复制(semi-conservative replication): 一个DNA分子可复制成两个DNA分子，新合成的两个子代DNA分子与亲代DNA分子的碱基顺序完全一样。每个子代DNA中有一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成链，这种合成方式称为半保留复制。 NTPs Dna A 后随链的 RNA引物 后随链的 RNA引物 Dna A 5 3 3 5 5 5 DNA Pol III dNTPs NTPs DNA Pol III DNA Pol III 后随链的 RNA引物 后随链的 RNA引物 (2) 复制的延伸(elongation) ： 合成前导链的DNA Pol III核心酶 合成后随链的DNA Pol III核心酶 第1个RNA引物 第3个RNA引物 第2个RNA引物 延长中的冈崎片段 引发体 解链酶 Rep 蛋白 * 一、 DNA复制相关概念 复制叉(replication fork)： 指DNA在复制时复制区域的双螺旋解开所产生的两条单链和尚未松解开的双螺旋形成的“Y”形区 。 在复制叉区域发生双链的不断分离和新链的合成，代表DNA复制中的生长点(growing point) 。 DNA 双链模板 移动方向 解开的模板单链 解开的模板单链 新生链 切口(nick)：在双链DNA的一条单链上失去一个磷酸二酯键的位置称为切口。 缺口(gap)：双链DNA的一条单链上失去一段单链的位置称为缺口。 切口 切口 缺口 缺口 二、 DNA复制的特点 实验证据：Meselson和Stahl(1958)的同位素示踪实验；Cairns的大肠杆菌染色体DNA复制放射自显影实验。 DNA复制同位素示踪实验 —— Meselson and Stahl (1958) 15N-DNA 亲代 子一代 15N,14N-DNA 14N-DNA 15N-14N-DNA 子二代 3. 复制遵循碱基配对原则(base pairing rule ): 碱基配对是核酸分子间传递信息的结构基础。 5. DNA复制是引发性复制(priming replication): DNA复制时，先由引物酶(primase)以解开的DNA模板链为模板合成一小段RNA引物，DNA聚合酶再从RNA引物的3-OH端开始新DNA链的合成，引物长度一般为几个到十多个核苷酸。 4. 复制的高保守性(high fidelity of DNA replication ): DNA复制中的碱基配对原则保证了DNA复制的忠实性，由于DNA是遗传信息的携带者，因此可使亲代的性状特征准确的传递给子代。 6. 复制的多向性： DNA复制可以单向进行，也可以双向进行，还可以通过滚环及D-环方式进行。 Replication fork Origin 单向复制(unidirectional replication) Replication fork Origin 双向复制(bidirectional replication) 滚环复制(rolling circle replication) 5 3 5 3 D-环复制(D-Loop replication) Origin Origin 7. 对称性复制与非对称性复制: 对称复制是指两条链的复制同时进行；不对称复制是指复制时先复制合成其中一条链后再进行另一条链的复制。 三、参与DNA复制的重要细胞组分 1. DNA聚合酶(DNA polymerase )： 全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase) 简称：DNA-pol DNA聚合酶催化反应的特点： ① 底物：四种脱氧核糖核苷三磷酸(dNTPs) ； ② 引物：小段RNA序列； ③ 方向：聚合具有方向性，5→3进行； ④ 模板：聚合需要DNA模板链支持，产物DNA的性质与模板DNA相同。 (2) 大肠杆菌DNA聚合酶 ： * 对于多亚基酶，此处只列出聚合活性亚基的结构基因。 ? 仅聚合活性亚基。DNA Pol II和III共有亚基包括β、γ、δ、δ、χ和ψ。 复制 修复(不详) 切除引物，修复 功能 500,000 1,500 3~200 持续合成能力 15,00~60,000 2,400 1,000~1,200 聚合速度(核苷酸/min) - - + 5→3核酸外切酶活性 + + + 3→5核酸外切酶活性 830