第1节 色谱导论.ppt

气相色谱载气流速与柱效——最佳流速 载气流速高时： 传质阻力项是影响柱效的主要因素，流速?，柱效?。 载气流速低时： 分子扩散项成为影响柱效的主要因素，流速?，柱效? 。 H - u曲线与最佳流速： 以塔板高度H对应载气流速u作图，曲线最低点的流速即为最佳流速。 (3) 速率理论的要点 (1)组分分子在柱内运行的多路径与涡流扩散、浓度梯度所造成的分子扩散及传质阻力使气液两相间的分配平衡不能瞬间达到等因素是造成色谱峰扩展柱效下降的主要原因。 (2)通过选择适当的固定相粒度、流动相种类及流速可提高柱效。 (3)速率理论为色谱分离和操作条件选择提供了理论指导。阐明了流速和柱温对柱效及分离的影响。 (4) 各种因素相互制约，如流动相流速增大，分子扩散项的影响减小，使柱效提高，但同时传质阻力项的影响增大，又使柱效下降；柱温升高，有利于传质，但又加剧了分子扩散的影响，选择最佳条件，才能使柱效达到最高。 色谱基础理论小结 塔板理论和速率理论各有何特点？ 根据速率理论方程，色谱填料粒径、填充均匀性、载气种类、流速、分离温度等条件是怎样影响柱效的？ 1.4 色谱分析方法建立 1 选择合适的仪器 　　GC or HPLC 　　检测器 　　色谱柱 2 对样品进行合适的前处理 3 分离条件优化 4 色谱定性、定量分析 1.4.1 色谱定性分析 （1）利用纯物质对照定性 保留时间或保留距离定性。 适用于组分性质已有所了解，组成比较简单，有纯物质的未知物。 （2）加入已知物增加峰高法 （3）保留值经验规律定性法 碳数规律： lgtR=A1+B1n （4）保留指数定性法 保留指数也是一种相对保留值，它是把正构烷烃中某两个组分的调整保留值的对数作为相对的尺度，并假定正构烷烃的保留指数为n?100。被测物的保留指数值可用内插法计算。 (5) 双柱、多柱定性 （6）与结构分析仪器联用定性 红外光谱、质谱、核磁共振、元素分析 离线： LC样品收集：挥发性溶剂，易去除的缓冲液。 GC样品收集：低温冷阱、低温吸附或溶剂溶解。 IR-KBr粉末吸收 在线：GC-MS;LC-MS. 1.4.2 色谱定量分析 （1）峰高、峰面积 对称形峰面积的测量—— 峰高乘以半峰宽法 不对称形峰面积的测量—— 峰高乘平均峰宽法。 自动积分：基线较平，分离较好。 手动积分：基线波动较大。 绝对校正因子： fi = mi / Ai 相对校正因子： fi? =（mi /Ai）/（ms/As）=（mi / ms）?（As / Ai ） （2）定量校正因子 含量 100 100 200 面积 3000 2500 4000 归一化法 所有出峰组分的含量之和按100%计的定量方法。 Pi % = (mi / m) ? 100% = Aif?i / (A1f?1 + A2f?2 + ?+Anf?n) ? 100% 简单、准确，不必称样和定量进样，操作条件变化时对定量结果影响不大。但样品的所有组分必须全部出峰。此外，测量低含量尤其是微量杂质时，误差较大。 （3）定量计算方法 外标法用被测化合物的纯品作为标准样品，配制成一系列的已知浓度的标样。在一定范围内，标样的浓度与响应值之间存在较好的线性关系。 实验条件要求高，如检测器的灵敏度，流速、流动相组成的不能发生变化；每次进样体积要有好的重复性。 外标法的优点： 操作、计算简单，是一种常用的定量方法。 无需各组分都被检出、洗脱。需要标样。标样及未知样品的测定条件要一致。进样体积要准确。 外标法缺点： 内标法 将一定量的纯物质作为内标物加入到准确称量的试样中，根据试样和内标物的质量以及被测组分和内标物的峰面积可求出被测组分的含量。 Pi % = (mi / m) ? 100% = ms Aif?i / Asf?sm ? 100% 对内标物要求： a．内标物须为原样品中不含组分 b．内标物与待测物保留时间应接近且R1.5 c．内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质 内标法抵消了上样体积，乃至流动相、检测器的影响，因此比外标法精确。  内标法优点 制样要求高；找合适内标物困难；已知校正因子。 内标法缺点 (4)分析方法的验证 线性范围： 精密度：不同浓度水准RSD。一般 RSD≤1.5%,痕量分析可放宽到10%。 检出限：以三倍的平均噪声S0计算方法D.L.=3S0/S(其中为S为灵敏度，即分析校准曲线的斜率) 定量下限≥10S0/S 回收