第2章生物制药工艺技术基础.pptVIP

一、物质的性质与提取 （二）活性物质的保护措施 1.?采用缓冲系统 2.?添加保护剂 3.?抑制水解酶的作用 4.?其他 避免紫外光、强烈搅拌、过酸、过碱或高温 3：生物活性物质的浓缩与干燥 3﹑1 浓缩方法 盐析浓缩 有机溶剂沉淀浓缩 加G凝胶浓缩 用聚乙二醇浓缩 超滤浓缩 真空减压浓缩与薄膜浓缩 3﹑2 干燥 减压干燥 喷雾干燥 冷冻干燥 4﹑生化物质的分离纯化方法 4.1方法特点 生物材料组成复杂，含量极微、易变性、分离几乎都在溶液中进行、需逐级分离以保持结构完整性、生物产品的均一性对环境关系十分敏感 4.2 基本原理 据分子大小﹑形状﹑分子电离性质﹑分子极性大小与溶解度不同﹑物质吸附性质不同﹑配体的特异性进行分离 4.3 基本程序及实验设计 4.4 分离方法步骤优劣的综合评价 从分离纯化步骤的好坏、分辨能力、重现性、回收率等考虑 4.5 综合评价与制备物均一性的鉴定 第二节　微生物制药工艺技术基础 一：微生物菌种的选育与菌种保藏 １：菌种的分离与筛选 Ａ：菌种的分离：含菌样品的收集→富集培养→菌种的纯化 Ｂ：菌种的选育 １）自然选育：微生物在一定的自然条件下产生的自发突变，经分离筛选获得维持原有生产力水平的植株． ２）诱变育种 出发菌株的选择 稳定性强，具备某种优良性状，菌种的生理状态及生长发育时间（细菌处于营养体比处于对数生长期的菌体为佳） 诱变处理 提高生物诱变频率的物质叫诱变剂，常采用物理诱变、化学诱变、生物诱变 突变体的筛选 随机筛选、半理性化筛选 ３）现代菌种选育技术 杂交育种 原生质体融合 基因工程技术 ２：菌种的保藏 Ａ：菌种的退化与防止：防止基因突变，采用双重缺陷型，制定科学管理制度，认真分离单菌落，选择利于高产菌株的培养条件 Ｂ：常用的菌种保藏法：斜面低温保藏法，液体石蜡封藏法，冷冻干燥保藏法，液氮超低温保藏法，甘油冷冻保藏法，其它干燥保藏法 Ｃ：菌种保藏法的注意事项：防止杂菌污染，保藏用的菌种需选生长丰满，生长时间不宜过长，及时采用有效方法复壮，传代次数不宜过多，接种斜面不宜过密，接种量必须控制适当。 二　微生物的培养 １；微生物生长的六大营养要素：碳源，氮源，能源，生长因子，无机盐，水 ２：微生物的培养基 Ａ：培养基的种类：按来源分为合成培养基和天然培养基；按状态分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基；按用途分为孢子培养基、种子培养基和发酵培养基 Ｂ：影响培养基质量的因素：原材料质量的影响，水质的影响，灭菌操作，培养基黏度的影响 ３：灭菌与除菌的方法 １）灭菌方法：加热灭菌，辐射灭菌，介质过滤灭菌，化学灭菌（乙醇、甲醛、新洁尔灭、石碳酸、气体灭菌法 ２）培养基与发酵设备的灭菌方法：实罐灭菌、空罐灭菌、连续灭菌、发酵附属设备及管路的灭菌 ４：微生物培养的方法； Ａ：培养装置：恒温箱，振荡培养器等 Ｂ：培养方法：固体培养法（斜面培养、平板培养、穿刺培养等）、液体培养法（静止培养法、振荡培养法、通气培养法） Ｃ：培养注意事项：注意温度和通气、注意pH值和培养基的组成，防止杂菌污染 三、发酵过程的控制 １：发酵过程的主要控制参数 １.1、物理参数 检测参数 检测方法 单位 影响 温度 铂电阻 热敏电阻 ℃ μ qP c* 罐压(0.20.5×105Pa) 隔膜传感器 压敏电阻 Pa 保持正压，防止染菌 O2 及 CO2 的溶解度 搅拌转数 频率计数器 r/min Kla 发酵液的均匀性 搅拌功率(2 -4KW/m3) 功率计 Kw Kla 空气流量 浮子流量计 孔板差压计 m3?h-1 vvm Kla 粘度 旋转粘度计 Pa?s Kla 浊度 浊度计 % 反映单细胞的生长 料液的流量 蠕动泵 荷重传感器、量筒 L?h-1 S １.２、化学参数 检测参数 检测方法 单位 影响及作用 PH 复合玻璃电极 菌体和产物合成速度 酶促反应的方向 基质浓度 产物浓度 HPLC 离子选择电极 生物传感器 取样 g?L-1 μ qP 发酵周期的长短 氧化还原电位 氧化还原电位电极 mV 生长和生化活性 溶氧浓度 覆膜氧电极 % qo2 气相O2含量 顺磁氧分析仪 Pa 反映OUR