0821酶联免疫检测技术资料.pptxVIP

贵州勤邦食品安全科学技术有限公司 扶 胜;;;;食品安全已成为衡量人类生活质量、社会管理水平和国家法制建设的一个重要方面。;我国食品生产经营企业规模化、集约化程度不高，自身管理水平仍然偏低； 防范犯罪分子利用食品进行犯罪或恐怖活动的重要性越来越突出； 食品安全监督管理的条件、手段和经费还不能完全适应实际工作的需要。 ; 监管机构改革;1965年;据新华社北京2014年5月14日电 国务院总理李克强5月14日主持召开国务院常务会议，讨论通过《中华人民共和国食品安全法(修订草案)》。修订草案重点就强化生产经营者主体责任、建立最严格的监管处罚制度等方面作了完善。会议决定，修订草案经进一步修改后提请全国人大常委会审议。;2014年，国务院办公厅印发《2014年食品安全重点工作安排》，着重解决九方面问题： 开展食用农产品质量安全源头治理。 深入开展婴幼儿配方乳粉专项整治。 开展畜禽屠宰和肉制品专项整治。 开展食用油安全综合治理。 开展农村食品安全专项整治。 开展儿童食品、学校及周边食品安全专项整治。 开展超过保质期食品、回收食品专项整治。 开展“非法添加”和“非法宣传”问题专项整治。 开展网络食品交易和进出口食品专项整治。;食源性疾病仍然是危害公众健康的最重要因素； 食品中新的生物性和化学性污染物对健康的潜在威胁已经成为一个不容忽视的问题； 食品新技术、新资源(如转基因食品、酶制剂和新的食品包装材料)的应用给食品安全带来新的挑战。; 风险分析已成为食品安全科技发展的核心； 加快实施食品安全标准化战略体系，全面覆盖限量标准和操作规范； 食品安全检测技术趋于集成化、系列化； 溯源、预警体系是防范食品安全突发事件、构建和谐社会的重要措施。;目前主要检测方法有仪器分析法和免疫分析法。 仪器分析法如气相色谱法、高效液相色谱法、色质联用法等，具有较高的灵敏度、准确度和精确度，作为确证的方法必不可少。 但该方法所用仪器设备昂贵、操作繁琐费时、需要专业的操作人员、前处理复杂不能实现快速检测，这在一定程度上限制了其普及和应用。; 前处理技术自动化； 检测灵敏度、速度、集约化要求越来越高； 配套微型分析系统，体现智能化、精密化、远程控制； 通过新型检测技术的开发满足更多残留检测的要求； 比如：免疫胶体金技术与读卡器相结合、酶联免疫检测技术与化学发光技术联用等。;理化鉴别技术 色谱分析技术 光谱分析技术 紫外、可见光分析技术 红外光谱技术 拉曼光谱技术 荧光光谱技术 电化学分析技术 分子生物学技术;; 基本原理 ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA），抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。;1. 抗原抗体反应的特点 1.1　可逆性 抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag·Ab　 抗体的亲和力可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab], Ag·Ab的解离程度与K值有关。 高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合，两者结合牢固，不易解离。解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性。 ;1.2 敏感性 ① 化学比色法的敏感度为mg/ml水平。 ② 酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml。 ③ 免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿。 ④ 标记的免疫敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平。 如三唑磷、克百威药物，其敏感度可达0.5ng/ml及以下。;1. 3　特异性 抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。即“钥匙与锁”的关系。 ; ELISA中常用名词 1）半抗原: 只有免疫反应性，而无免疫原性的小分子物质。如药物、多糖、类脂等。 2）抗原: 凡是能刺激机体产生免疫应答并能与应答产物特异结合的物质。 3）载体: 赋予半抗原具有免疫原性的蛋白质分子。 4）抗体:可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。 5）灵敏度:能够引起竞争反应的抗原（抗体）的最低浓度，一般是指试剂盒中第二个标准品的浓度。 ;2、ELISA的类型 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 有三个必要的试剂： （1）固相的抗原或抗体，即免疫吸附剂（immunosorbent）； （2）酶标记的抗原或抗体，称为结合物（conjugate）； （3）酶反应的底物。;方法类型： 1）双抗体夹心法测抗原 2）双抗原夹心法测抗体 3）间接法测抗体