畜禽繁殖与改良技术任务6-3 胚胎移植.pptVIP

2、供体的超数排卵处理与人工授精 （1）根据母牛自然发情周期进行超排 所用激素：FSH、PG 牛超排方法： 时间 第1天 第5天 第6天 第7天 第8天 第9天 第10天 早上7时 放栓 雌二醇2mg 孕酮100mg FSH 4ml FSH 3ml FSH 4ml PG4mg FSH 1ml 发情 人工授精 晚上7时 FSH 4ml FSH 3ml FSH 2ml撤栓 FSH 1ml 人工授精 发情后8－12小时配种，间隔12小时再配种一次。 （2）利用阴道栓人工控制卵泡波进行超排 3、受体牛的同情发情 （1）前列腺素处理法 （2）孕激素处理法 PGF2a或氯前列烯醇 时间：早于供体牛1d 方法：间隔约12天，两次注射。 方法：耳部埋植，9—12天取管。 4、胚胎收集 （1）冲胚液和保存液的制作 冲胚液有很多种，目前最常用的为含5%犊牛血清的杜氏磷酸盐缓冲液（D-PBS），也可用于体外短期保存胚胎。 保存时间长或体外培养多用M-199液。 （2）胚胎收集方法 ——非手术法冲卵 ①采卵时间 ②常规采卵法 ◆牛的非手术收集胚胎可利用三路式导管冲卵器。外管前端连接以气囊，当将冲卵器插入子宫内时，充气使气囊胀大，堵住子宫颈内口以免冲洗液经子宫颈流出。将冲洗液通过内管注入子宫角内，然后由另一导管导出冲洗液。 ◆ 每侧子宫角需冲洗100-150ml。冲洗液的导出应顺畅，并尽可能回收全部注入的容量。 母牛非手术冲卵示意图 PBS 集卵杯 子宫颈 子宫角 卵巢 牛的非手术法回收胚胎 a.冲卵液 b.硬膜外麻醉 c.插入子宫中的Foley管 d.子宫颈 母牛非手术冲卵示意图 ③子宫体冲卵法 ④供体母牛采卵后的处理 向子宫内注射抗菌素或前列腺素 冲卵管通过子宫颈后，充气把输卵管拉紧，固定在宫体和子宫颈内。子宫充满液体后回收，按摩子宫角前端，两角同时回收，反复5~6次。 5、胚胎检查 收集到的冲冼液，需静置10min，使胚胎下沉到容器底部，然后移去上清液，再放于解剖镜下检查胚胎的数量和发育情况，再将发育正常的胚胎收集到注射器或移植管内供移植用。 ?沉降法 ?胚胎过滤杯法 ?检卵 6、胚胎评定 A级:形态完整,轮廓清晰,呈球形,分裂球大小均匀,透明带适中； B级:轮廓清晰,色调和细胞密度良好； C级:轮廓不清楚,色调发暗,结构较松散,游离的细胞和液胞较多； D级:轮廓模糊,色调暗,结构松散,碎片细胞和液泡很多。 发育正常的胚胎 牛的异常胚胎示意图 胚胎品质的衡量图 牛排卵8d内胚胎发育情况及存在部位 7、胚胎的移植——非手术法移植 （1）受体母畜的准备——以牛为例 重点应检查子宫和卵巢的异常情况以及子宫的紧张性，然后检查卵巢上黄体的发育情况（位置、大小），只有黄体发育良好者才能正式列为待移植母牛，并记录和在牛臀部标出黄体位于左右哪一侧。 牛站立保定于六柱栏保定架内，用2%盐酸利多卡因或普鲁卡因进行荐尾椎硬膜外麻醉，用18号针头，每只牛约5ml。  将胚胎装入0.25ml的塑料细管内 （2）胚胎装管  1.1ml注射器 2.装管接头 3.细管 A.棉塞 B.气泡 Ⅰ、Ⅲ、保护液 Ⅱ.含胚段 装管器械和装管方法 胚胎装管图 （3）胚胎的移植 直肠检查黄体位置后，最好先作硬膜外腔麻醉，然后似人工授精般将胚胎用移植管通过子宫颈放入到与黄体同侧的子宫角的大弯或大弯深处内，或两侧子宫角各放一枚胚胎。 直肠把握法 8、受体母牛的妊娠诊断 ?受体母牛移植后要保证科学、正常的饲养管理。移植约2周后，注意观察是否返情。 ? 2个月后可用直肠检查法确定妊娠 ? 30d用B型超声波确定妊娠 ?怀孕母牛要注意做好妊娠期的管理及接产工作。 羊的胚胎移植 1.供体的超数排卵技术 1.1 超排方案 超排方案1(FSH+PG法)：从供体发情周期的第9-13天开始注射FSH，以日递减剂量连续注射3天6次，每次间隔12小时,总剂量为150-300IU，在第5次注射FSH的同时肌注氯前列稀醇0.1毫克。 1.供体的超数排卵技术 1.供体的超数排卵技术 超排方案2(CIDR+FSH+PG法)：在发情周期的任何一天给供体阴道内放入CIDR，计为0天，然后于第9-13天任何一天开始肌注FSH，递减法连续注射3天共6次，在第5次肌注FSH时取出CIDR，并肌注氯前列稀醇0.1毫克，一般在取出CIDR后24-48小时发情。 2.胚胎的回收 2.1术前准备 场所、器械和人员的准备 供体羊的术前准备：术前1日停止喂食但不停水；术部剃毛；麻醉现多用速眠新全麻；术部皮肤先用2%-4%的碘酒消毒，晾干后再用70%-75%的酒精棉涂擦脱碘。将创巾固定在术部周围并露出术部。 《畜禽繁